[发明专利]用于克隆和操作基因组的方法

摘要

本文公开了用于在异源宿主细胞中克隆供体基因组的组合物和方法。在一种实施方式中，供体基因组可在宿主细胞中被进一步修饰。修饰的或未修饰的基因组可进一步从宿主细胞分离并转移到受体细胞。本文公开的方法可用于在更加容易处理的宿主细胞中改变来自难处理供体细胞的基因组。

主权项

1.用于制造自我复制的合成细胞的方法，所述方法包括：(i)装配合成的细菌、蓝细菌或微藻供体基因组为一条或多条片段，并且将作为一条或多条片段的所述供体基因组和宿主载体引入酵母宿主细胞，其中所述供体基因组和所述宿主载体在引入所述酵母宿主细胞之前或之后连接；(ii)从所述酵母宿主细胞回收所述装配的供体基因组；(iii)进行步骤a)或b)或c)，其中a)、b)和c)分别为a)通过甲基化所述供体基因组制备所述供体基因组，用于移植入细菌、蓝细菌或微藻受体细胞；b)通过除去或失活在受体细胞中存在的切割所述供体基因组的限制性内切酶功能，制备细菌、蓝细菌或微藻受体细胞；c)提供缺少切割所述供体基因组的限制性内切酶功能的细菌、蓝细菌或微藻受体细胞；和(iv)将所述回收的供体基因组引入所述受体细胞，从而生成包括所述供体基因组并仅由所述供体基因组控制的自我复制的合成细胞，其中所述供体基因组足够维持所述受体细胞的生存和连续的自我复制；和其中所述合成细胞支持所述供体基因组的基因表达，并且具有所述供体基因组的表型，其中所述供体基因组是长度大于300kb的完整的最小基因组。