[发明专利]重组人尿胰蛋白酶抑制剂的生产方法

摘要

本发明公开了生产重组人尿胰蛋白酶抑制剂的方法，将人的h-UTI基因分别与人血白蛋白中的第一个结构域基因序列融合后，插入到专门的表达载体PlCZa中表达，构造的工程菌种在发酵罐中进行发酵培养，诱导结束后，离心收集发酵上清液，添加NaCl，用NaOH调节发酵上清液的pH至7.4，添加磷酸盐至终浓度为50mM，膜过滤得可用于Ni2+-螯合层析上样的发酵液。50mM咪唑洗脱下DoI-UTI融合蛋白，脱盐并将DoI-UTI转换到肠激酶的酶切缓冲溶液中，酶切完成后再过螯合层析介质和离子交换介质得到rh-UTI。本发明能解决酵母中表达h-UTI均一性以及表达产量不高等难题。

主权项

一种生产重组人尿胰蛋白酶抑制剂的方法，其特征在于包括：将人的h‑UTI基因分别与人血白蛋白的第一个结构域基因序列融合后，插入到专门的表达载体PlCZa中表达，构造的工程菌种按照Invitrogen的发酵操作手册中的程序，在30L发酵罐中进行发酵，其中发酵过程的关键性参数是pH6.0、30℃、溶氧在20％‑30％之间，诱导时间为50小时；诱导结束后离心收集发酵上清液，添加NaCl，用NaOH调节发酵上清液的pH至7.4，添加磷酸盐至终浓度为50mM，膜过滤即得可用于Ni2+‑螯合层析上样的发酵液；50mM咪唑洗脱下DoI‑UTI融合蛋白，脱盐并将DoI‑UTI转换到肠激酶的酶切缓冲溶液中，酶切完成后再过螯合层析介质和离子交换介质就可以得到rh‑UTI。