[发明专利]重组人尿胰蛋白酶抑制剂的生产方法在审
| 申请号： | 201210488613.5 | 申请日： | 2012-11-16 |
| 公开（公告）号： | CN103014057A | 公开（公告）日： | 2013-04-03 |
| 发明（设计）人： | 苟兴华;邬晓用;邹亮;刘达玉;王卫;唐仁勇;邹凯 | 申请（专利权）人： | 成都大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12R1/84 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 610106 *** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 胰蛋白酶 抑制剂 生产 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种生产重组人尿胰蛋白酶抑制剂的方法，其特征在于包括：
将人的h-UTI基因分别与人血白蛋白的第一个结构域基因序列融合后，插入到专门的表达载体PlCZa中表达，构造的工程菌种按照Invitrogen的发酵操作手册中的程序，在30L发酵罐中进行发酵，其中发酵过程的关键性参数是pH6.0、30℃、溶氧在20％-30％之间，诱导时间为50小时；诱导结束后离心收集发酵上清液，添加NaCl，用NaOH调节发酵上清液的pH至7.4，添加磷酸盐至终浓度为50mM，膜过滤即得可用于Ni2+-螯合层析上样的发酵液；50mM咪唑洗脱下DoI-UTI融合蛋白，脱盐并将DoI-UTI转换到肠激酶的酶切缓冲溶液中，酶切完成后再过螯合层析介质和离子交换介质就可以得到rh-UTI。
2.根据权利要求1所述生产重组人尿胰蛋白酶抑制剂的方法，其特征在于：所述的专门的表达载体PlCZa是指线性化的PICZa-Do1-UTI表达载体。
3.根据权利要求1所述生产重组人尿胰蛋白酶抑制剂的方法，其特征在于：所述的表达菌株是GS115.UTI1，GS115.UTI2和GS115.UTI8菌株中的任意一种。
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