[发明专利]双表达的AAV重组病毒的制备方法有效
| 申请号： | 201210474111.7 | 申请日： | 2012-11-09 |
| 公开（公告）号： | CN102925485A | 公开（公告）日： | 2013-02-13 |
| 发明（设计）人： | 柳纪省;杨彬;兰喜;邱燕;殷相平;李学瑞;李宝玉;白银梅;张韵;李志勇;方玉萍 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N15/864 | 分类号： | C12N15/864;C12N15/66 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 730046 *** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种双表达的AAV重组病毒的制备方法，采用基因克隆技术将合成的特异性PRRSV RNA干扰寡核苷酸序列克隆至AAV Helper Free System中的表达质粒pAAV-U6-IRES-hrGFP的U6启动子下游，将PRRSV的ORF5-6结构蛋白基因克隆至pAAV-U6-IRES-hrGFP的CMV启动子的下游，构建成双效腺相关病毒载体pAAV-U6-IRES-hrGFP-siRNA-ORF5-6，通过酶切及PCR鉴定后进行DNA测序以鉴定重组质粒。实验证实，双效质粒转染靶细胞Marc145，有延迟细胞病变的作用，说明双表达AAV疫苗载体能够转录出siRNA，对病毒的转录复制有一定的抑制效果。 | ||
| 搜索关键词： | 表达 aav 重组 病毒 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种双表达的AAV重组病毒的制备方法，其特征在于，采用基因克隆技术将合成的特异性PRRSV RNA干扰寡核苷酸序列克隆至AAV Helper Free System中的表达质粒pAAV‑U6‑IRES‑hrGFP的U6启动子下游，将PRRSV的ORF5‑6结构蛋白基因克隆至pAAV‑U6‑IRES‑hrGFP的CMV启动子的下游，构建成双效腺相关病毒载体pAAV‑U6‑IRES‑hrGFP‑siRNA‑ORF5‑6，通过酶切及PCR鉴定后进行DNA测序以鉴定重组质粒。
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