[发明专利]一种高效分离和扩增人脐带血间充质干细胞的方法

摘要

本发明涉及对在细胞治疗中最为理想的脐带血间充质干细胞进行高效分离扩增的方法。已经证明脐带血中含有分化能力较高，免疫排斥反应较小的间充质干细胞。脐带血银行的建立为实现自体细胞移植提供基础。但是，由于脐带血中间充质干细胞含量极低（1×108个单核细胞中仅含有0.5-30个），因此如何高效分离和扩增这些细胞成为了阻碍脐带血间充质干细胞向临床转化的难题。目前，多利用该细胞在培养皿的吸附能力，对脐带血间充质干细胞进行分离，但是成功率低，并且在扩增过程中难以保持干细胞特性。本发明包括利用蛋白成分对培养皿进行包被，配合添加多种生长因子的培养基，构建脐带血间充质干细胞扩增环境，实现了该细胞的高效扩增和分离。

主权项

一种高效分离和扩增人脐带血间充质干细胞的方法，其特征在于该方法为：a.收集脐带血样品：所述脐带血样品自医院采集，或自脐带血库中获取的人脐带血样品，在无菌条件下获取正常或早产胎儿的脐带血,肝素抗凝；b.分离脐带血中单核细胞成分：所述脐带血血样品均应经过肝素抗凝，羟甲基纤维素裂解红细胞，密度梯度离心获取单核细胞成分之后进行接种；脐带血间充质干细胞的分离纯化过程在分娩后24小时内进行；c.将单核细胞成分接种于包被蛋白基质成分的培养皿：包被蛋白基质指层连蛋白和明胶蛋白按体积比1：2混合；d.分离间充质干细胞：细胞接种于上述包被的细胞培养板后，使用脐带血间充质干细胞培养基培养，及时除去未贴壁细胞并更换培养基，此时，脐带血间充质干细胞得到分离；e.培养和扩增间充质干细胞：继续使用脐带血间充质干细胞培养基培养，每5‑8天换液一次，直至细胞为80‑95%融合；细胞用胰酶进行消化，接种于一般培养板，使用脐带血间充质干细胞培养基继续培养，2‑4天换液一次，直至融合，并进行下一次传代，实现间充质干细胞的扩增。