[发明专利]一种可保持蛋白质活性的软骨组织分级处理方法

摘要

本发明涉及一种可保持蛋白质活性的软骨组织分级处理方法，通过切片处理，可以将软骨组织切成厚度为5-20μm的切片，在此过程中软骨组织中的细胞多数被切割破裂。再经反复冻融处理后，细胞结构均被破坏。将组织切片置于提取溶液中，搅拌超声处理。将组织片取出，获得的细胞类成分A。将取出的组织片再置于清洗溶液中，搅拌超声处理，彻底清除细胞类成分。将取出的组织切片置超纯水溶液中搅拌。将组织切片吸干水分后获得基质类成分B。用适当溶剂提取基质成分B中的蛋白质类物质，进行组学分析和活性实验。本发明的优点为：可以实现软骨组织中，细胞类成分和细胞外基质类成分的分离。

主权项

一种可保持蛋白质活性的软骨组织分级处理方法，其特征在于，包括如下步骤：1)获得动物软骨组织，将附带组织及残留血液清除干净；2)用冷冻切片机将软骨组织切成5‑20μm的切片，将切片于‑80℃快速冰冻后，再于室温完全融化，重复上述冻融过程1‑4次；3)将组织切片1g置于4‑10ml提取溶液中，在4‑37℃搅拌1‑5h，超声处理1‑5min，将组织切片取出吸干水分后，置于新的提取溶液中；4)重复步骤3）2‑4次，组织切片取出后吸干水分，将所得提取液合并，置于超滤离心管中，截留分子量为3‑10kD，在500‑5000r/min范围内离心30min‑6h；5)向步骤4）所得浓缩液中加入4‑10ml超纯水，在500‑5000r/min范围内离心30min‑6h；重复操作2‑4次后，取出浓缩液冻干后，获得蛋白质组分A；6)将步骤4）所得组织切片置于4‑10ml清洗溶液中，在4‑37℃搅拌1‑5h，超声处理1‑5min，将组织切片取出吸干水分后，置于新的清洗溶液中，重复操作2‑4次；7)将步骤6）所得组织切片置于4‑10ml超纯水中，在4‑37℃搅拌1‑10min，将组织切片取出吸干水分后，置于新的超纯水中，重复上述操作2‑4次；8)取出步骤7）中的组织切片，冻干后获得基质类成分B。