[发明专利]一种桑蚕丝素固定化凝血酶的制备方法

摘要

本发明涉及一种桑蚕丝素固定化凝血酶的制备方法，属于医药卫生技术领域，包括三羟甲基磷的制备、丝素脱胶、脱胶丝素的活化、凝血酶的固定四个步骤，具体是：利用阻燃剂四羟甲基氯化磷（THPC）与氢氧化钾（KOH）反应得到三羟甲基磷（THP）；将已除杂的桑蚕茧切碎，加入碳酸钠溶液处理脱胶，用蒸馏水洗去碳酸钠，真空干燥得脱胶丝素；加入三羟甲基磷溶液中交联，分离，取固体部分用磷酸盐缓冲液洗，去除多余的三羟甲基磷，真空干燥得活化丝素；取适量加入凝血酶溶液中以固定凝血酶，完成后用磷酸缓冲液洗去游离的凝血酶，吸干，测定活力回收率。本发明工艺简单易行，生产周期较短，生产过程环保无毒；可为批量制备高纯度水蛭素提供物质基础。

主权项

一种桑蚕丝素固定化凝血酶的制备方法，其特征在于：包括以下几个步骤：三羟甲基磷（THP）的制备、丝素脱胶、脱胶丝素的活化、凝血酶的固定，具体方法如下：（1）THP的制备：取等摩尔量的四羟甲基氯化磷（THPC）与氢氧化钾(KOH)分别溶于90 mL和10 mL水中，剧烈搅拌下将KOH水溶液滴加到THPC水溶液中，滴加完毕反应结束，得THP；（2）丝素脱胶：将已除杂的桑蚕茧随机切碎，将桑蚕茧加入质量分数为0.5%的碳酸钠溶液，于100 ℃温度下以300 r·min‑1搅拌25~35min，取出，按碳酸钠溶液3倍的量加入蒸馏水洗涤3次，每次25~35 min，重复质量分数为0.5%的碳酸钠溶液处理和蒸馏水洗涤步骤各1次，然后于45~55℃真空干燥25~35min得脱胶丝素；（3）脱胶丝素的活化：将脱胶丝素加入THP溶液后，以300 r·min‑1搅拌，于25~35℃交联35~45min，交联结束后用0.1 mol·L‑1 pH值为7.5~8.0的磷酸盐缓冲液洗10~15 min，去除多余的THP，于50 ℃真空干燥得活化丝素，备用；（4）凝血酶的固定：将100 mL浓度为15 抗凝血酶活力单位(ATU)·mL‑1的凝血酶溶液加入0.1~0.3 g活化丝素，于25℃以300 r·min‑1搅拌，固定3.5~4.5 h后，用0.1 mol·L‑1 pH值为7.5~8.0磷酸缓冲液洗至洗脱液于280 nm波长处无光吸收，吸干，用生理盐水浸泡，准备测定活力回收率。