[发明专利]一种检测咖啡中高级脂肪酸的方法

摘要

本发明涉及一种咖啡中高级脂肪酸的分析方法。采用特殊的样品前处理方法对咖啡样品进行处理，并在特定的超高效液相色谱-蒸发光散射检测器的条件下进行色谱分析。对咖啡中高级脂肪酸的种类和含量进行了准确的定性和定量分析。本发明不需要增加特殊设备，即可适用于一般超高效液相色谱分析室采用。应用范围包括所有种类的咖啡及咖啡副产物，该法具有操作简单、分析速度快、检测全面等特点，能够对咖啡样品进行快速检测分析，为以后的咖啡营养成分分析、营养评价等方面的研究提供了科学可靠的分析方法。

主权项

一种检测咖啡中高级脂肪酸的方法，其特征在于按以下步骤进行：1）制备6种高级脂肪酸的标准溶液：（1）分别称取20‑30、20‑40、20‑40、20‑30、10‑20、20‑30 mg的亚麻酸、亚油酸、棕榈酸、油酸、肉豆蔻酸和硬脂酸，置于同一50 mL 容量瓶中，加少许甲醇超声溶解后取出，冷却至室温，用甲醇定容至50 mL，配制成标准储备液；用10 mL的容量瓶分别将标准储备液稀释2‑10倍，用甲醇定容10 mL，得到不同浓度的高级脂肪酸标准工作液，摇匀备用；（2）在超高效液相色谱仪的C18分析柱上，以乙酸水溶液‑乙腈为流动相梯度洗脱游离高级脂肪酸；色谱条件如下：分析柱：C18柱，100 mm×2.3 mm i.d.,1.7 um流动相：流动相A为体积比为1‑2%乙酸水溶液，流动相B为乙腈；洗脱方式：梯度洗脱检测器条件：蒸发光散射检测器的漂移管温度：50‑80 ℃；蒸发光散射检测器的载气：氮气（纯度＞99.9％），流速为2.89‑4.5 L/min；气体压力：40.0‑60 psi；喷雾器模式：冷却；增益值：400‑800；（3）按照浓度由低到高分别对高级脂肪酸标准工作液进行超高效液相色谱‑蒸发光散射器测定，并将测得的峰面积y与标准溶液的质量浓度x mg/L进行Log‑Log线性回归分析，得到6种高级脂肪酸的标准曲线方程， log(y)=a×log(x)+b，其中a为标准曲线方程中一次方系数，b为标准曲线方程中零次项系数；2）咖啡样品的制备：将磨碎至40‑60目的咖啡样品0.0500g‑0.1000g置于100‑150 mL圆底烧瓶中，加入40‑80 mL 浓度为2‑ 4mol/L的KOH‑甲醇溶液，于40‑70℃水浴中回流皂化20‑80 min，冷却至室温，过滤至具塞三角锥形瓶中，加入10‑30 mL蒸馏水，混匀，用质量分数浓度20‑36％盐酸调节滤液的pH<7，用10‑20mL二氯甲烷萃取3次，合并3次的二氯甲烷层，用15‑40 mL蒸馏水洗涤二氯甲烷层，二氯甲烷层用氮吹自动浓缩仪蒸干，残余物用甲醇溶解并定容至5‑15 mL，用0.22 μm微孔有机滤膜过滤，取滤液进行超高效液相色谱‑蒸发光散射器测定，得到试样中高级脂肪酸的峰面积A试样；3）用外标法定量分析计算[lgA试样‑b]/a= lg C试样A试样：试样色谱图中高级脂肪酸的峰面积；C试样：试样中高级脂肪酸的浓度；a为标准曲线方程中一次方系数；b为标准曲线方程中零次项系数。