[发明专利]一种用于提取紫珠属植物叶片DNA的方法

摘要

本发明公开了一种用于提取紫珠属植物叶片DNA的方法，该方法是对传统SDS提取法的改进，适用于紫珠属植物的新鲜叶片或硅胶干燥叶片DNA提取，可有效解决传统SDS法提取的总DNA带有少量蛋白，并消除紫珠属植物叶片内过多的黄酮类、缩合鞣质等杂质造成的DNA纯度低的问题。

主权项

一种用于提取紫珠属植物叶片DNA的方法，包括如下步骤：（1）在灭菌离心管中加入裂解液，备用，所述裂解液包含如下组分：pH8.0的Tris·HCl 80‑120mM、pH8.0的EDTA 30‑60mM、NaCl 60‑120mM、3‑6wt% PVP、1.5‑2wt% SDS、2‑3wt% 巯基乙醇、0.7‑1.2wt% RNAase；（2）取紫珠属植物的叶片，在研钵中加液氮迅速研磨呈粉末，然后将粉末转入所述离心管中，使样品与裂解液充分混匀；（3）将上述离心管置于62‑68℃水浴中保温15‑30min，期间轻轻摇动离心管2‑4次；（4）取出离心管，加入KAc使终浓度为0.8‑1.2M，然后冰浴15‑30min；（5）室温下10000‑15000rpm离心；（6）取上清液置另一灭菌离心管中，加入等体积的氯仿：异戊醇混合溶液，其配比是氯仿：异戊醇体积比为24：1，混匀，室温下6000‑10000rpm离心；    （7）取上清液置于新的灭菌离心管中，重复步骤（6）操作；    （8）离心后取上清液转入新的灭菌离心管中，加入2/3体积的‑20℃下预冷的异丙醇，混匀，置于‑20℃冰箱中20‑40min；        （9）取出后6‑12℃下10000‑15000rpm离心,弃上清液，收集沉淀；（10）加入70%（v/v）乙醇漂洗沉淀，然后6‑12℃下13000‑18000rpm离心，弃上清，收集沉淀；（11）重复步骤（10）操作；（12）弃上清，得基因组DNA。