[发明专利]一种用于提取紫珠属植物叶片DNA的方法

权利要求书

1.一种用于提取紫珠属植物叶片DNA的方法，包括如下步骤：

（1）在灭菌离心管中加入裂解液，备用，所述裂解液包含如下组分：pH8.0的Tris·HCl 80-120mM、pH8.0的EDTA 30-60mM、NaCl 60-120mM、3-6wt% PVP、1.5-2wt% SDS、2-3wt% 巯基乙醇、0.7-1.2wt% RNAase；

（2）取紫珠属植物的叶片，在研钵中加液氮迅速研磨呈粉末，然后将粉末转入所述离心管中，使样品与裂解液充分混匀；

（3）将上述离心管置于62-68℃水浴中保温15-30min，期间轻轻摇动离心管2-4次；

（4）取出离心管，加入KAc使终浓度为0.8-1.2M，然后冰浴15-30min；

（5）室温下10000-15000rpm离心；

（6）取上清液置另一灭菌离心管中，加入等体积的氯仿：异戊醇混合溶液，其配比是氯仿：异戊醇体积比为24：1，混匀，室温下6000-10000rpm离心；

    （7）取上清液置于新的灭菌离心管中，重复步骤（6）操作；

    （8）离心后取上清液转入新的灭菌离心管中，加入2/3体积的-20℃下预冷的异丙醇，混匀，置于-20℃冰箱中20-40min；    

    （9）取出后6-12℃下10000-15000rpm离心,弃上清液，收集沉淀；

（10）加入70%（v/v）乙醇漂洗沉淀，然后6-12℃下13000-18000rpm离心，弃上清，收集沉淀；

（11）重复步骤（10）操作；

（12）弃上清，得基因组DNA。

2.根据权利要求1所述用于提取紫珠属植物叶片DNA的方法，其特征在于包括如下步骤：

   （1）在灭菌离心管中加入裂解液，备用，所述裂解液包含如下组分：pH8.0的Tris·HCl 90-110mM、pH8.0的EDTA 45-50mM、NaCl 90-100mM、4-5wt% PVP、1.5-2wt% SDS、2.3-2.7wt% 巯基乙醇、0.9-1.1wt% RNAase；

    （2）取紫珠属植物的叶片，在研钵中加液氮迅速研磨呈粉末，然后将粉末转入所述灭菌离心管中，上下颠倒，使样品与裂解液充分混匀；

    （3）将上述离心管置于65℃水浴中保温20min，期间轻轻摇动离心管2-3次；

    （4）取出离心管，加入KAc使终浓度为0.95-1.05M，然后冰浴20 min;

    （5）室温下13000 rpm离心20 min；

    （6）取上清液置另一灭菌离心管中，加入等体积的氯仿：异戊醇混合溶液，其配比是氯仿：异戊醇体积比为24：1，轻轻颠倒离心管，混匀，室温下8000 rpm离心10min；

    （7）取上清液置于新的灭菌离心管中，重复步骤（6）操作一次；

    （8）离心后取上清液转入新的灭菌离心管中，加入2/3体积的-20℃下预冷的异丙醇，轻轻颠倒混匀，置于-20 ℃冰箱中30 min；

    （9）取出后9 ℃下13000 rpm离心10 min,弃上清液，收集沉淀；

    （10）加入70%（v/v）乙醇漂洗沉淀，然后9℃下15000 rpm离心15 min，弃上清，收集沉淀；

（11）重复步骤（10）操作一次；

（12）弃上清，得基因组DNA。

3.根据权利要求1或2所述用于提取紫珠属植物叶片DNA的方法，其特征在于：步骤（2）所述的植物叶片应去除叶柄、叶脉部分，取叶肉部分，其用量为约1cm²面积，质量约20mg。

4.根据权利要求1或2所述用于提取紫珠属植物叶片DNA的方法，其特征在于：所述紫珠属植物为白棠子、老鸦糊、紫珠、枇杷叶紫珠、大叶紫珠、白毛紫珠、杜虹花、短柄紫珠、裸花紫珠。

5.根据权利要求1或2所述用于提取紫珠属植物叶片DNA的方法，其特征在于：所述紫珠属植物的叶片为新鲜叶片或硅胶干燥叶片。