[发明专利]一种同时检测三种真菌毒素的胶体金速测卡的制备及使用方法

摘要

本发明涉及一种免疫胶体金速测卡，应用竞争抑制免疫层析的原理同时检测食品及饲料中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol，DON)、玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)和黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1，AFB1)。检测时，首先向加样孔中加入待检样本，如果样本中含有待检测真菌毒素，则样本中的真菌毒素在侧向移动的过程中与位于金标垫上的胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，从而抑制了金标抗体和NC膜检测线上相应的抗原-BSA偶联物的结合，则该检测线(T线)不显色，多余的金标单克隆抗体则与多余的酶标记抗体结合，控制线(C线)显色；反之，检测线(T线)为酒红色，控制线(C线)显色。并应用真针对食品和饲料样品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮和黄曲霉毒素B1等真菌毒素残留的快速、现场和灵敏的检测。

主权项

一种同时检测三种真菌毒素的胶体金速测卡的制备及使用方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：(1)将DON‑BSA、ZEN‑BSA、AFB1‑BSA以及酶标记抗体分别固定于NC膜上；(2)在偏碱性条件下将胶体金颗粒与特异性单克隆抗体通过静电作用力相互结合；(3)速测卡的组装：以下均以加样孔作为试纸条的下方。首先将固定有特异性单克隆抗体的金标垫盖在NC膜的下方其前沿搭在NC膜的底部1mm‑2mm处；玻璃纤维膜大小为4mm×15mm盖在金标试纸条的下方1mm‑1.5mm处，其前沿搭在金标垫的下部；吸收垫位于试纸条的最上方，其下部盖在NC膜的上方；(4)在上层的塑料板有两个的孔，分别为加样孔和结果观察孔；在塑料卡条下方靠近加样孔的位置依次往上并排粘贴的样品垫和固定有胶体金标记的针对DON、ZEN、AFB1的特异性单克隆抗体的金标垫、NC膜以及吸收垫；在NC膜上固定从加样孔往上依次固定DON‑BSA、ZEN‑BSA、AFB1‑BSA、羊抗鼠IgG，在金标垫上固定三种胶体金标记的单克隆抗体混合液。