[发明专利]一种同时检测三种真菌毒素的胶体金速测卡的制备及使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物技术领域的免疫胶体金速测卡的制作及其使用方法，具体是一种同时检测真菌毒素(脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素B1)的三联免疫胶体金速测卡的制作及其使用方法。

背景技术

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol，DON)、玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)和黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1，AFB1)等的真菌毒素是作物在生长及储藏过程中被病原真菌侵染后产生的次级代谢产物，它们对人类、畜禽具有遗传毒性、生殖毒性以及致癌性等毒性效应，是全球范围内最重要的三类真菌毒素。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol，DON)又称呕吐毒素，是由禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、黄色镰刀菌(Fusarium culmorum)、克地镰刀菌(Fusarium crookwellense)以及梨孢镰刀菌(Fusarium poae)等病原真菌侵染谷物(小麦、玉米、大麦以及燕麦)后产生的一种单端孢霉烯B族真菌毒素。研究报道，动物长期食用脱氧雪腐镰刀菌烯醇污染的谷物及饲料会导致其体重下降，并伴有呕吐现象。此外，DON还具有胚胎致畸毒性、神经毒性、免疫抑制毒性等。DON的熔点为153℃，传统的加热烹调无法将其降解。DON耐热，耐压，弱酸中不分解，加碱及高压处理可以破坏其部分毒力。DON的耐藏力也很强，据报道病麦经4年的贮藏，其中的DON仍能保留原有的毒性。

玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)，主要是由禾谷镰刀菌(Fusarium.graminearum)产生。此外据报道，黄色镰刀菌(Fusarium.culmorum)、镰刀菌蜀黍专化型(Fusarium.cerealis)，木贼镰刀菌(Fusarium.equiseti)，克地镰刀菌(Fusarium.crookwellense)以及半裸镰刀菌(Fusarium.semitectum)等也可以产生ZEN。ZEN主要发现于镰刀菌污染的小麦、玉米、大麦、燕麦、高梁等谷类作物，在粮食加工和贮藏过程中都会产生。经动物实验证明，ZEN具有类雌激素作用，它主要通过与动物体内的17β雌二醇竞争性结合雌激素受体(ER α和ERβ)而产生类雌激素效应，如雌性化、生殖紊乱和繁殖能力下降，造成动物卵巢萎缩，发情周期延长，死胎等。不同的物种对ZEN的敏感性表现不同。通过研究发现母猪是对ZEN最为敏感的动物，而家禽和反刍动物则对ZEN不敏感。在波多黎各曾有报道，ZEN可能与儿童性早熟有关。随着近年来国内外玉米赤霉烯酮污染粮食作物的案例不断发生，给人类的健康、畜牧业、饲料行业的发展带来了威胁。

黄曲霉毒素B1是由黄曲霉(Aspergillus flavus)、寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)和集峰曲霉(Aspergillus nomius)等真菌产生的次级代谢产物。主要发现于霉变的花生、玉米、水稻、坚果、可可豆、棉籽等粮食及其制品中。据文献报道，在中国，黄曲霉毒素B1主要的暴露途径是人和动物通过食用霉变的花生以及花生油、玉米和水稻。另外，豆类、肉制品、水产品、乳制品中也有检出黄曲霉毒素B1的报道。其中，花生和玉米污染最为严重。发酵食品中也能检测到黄曲霉毒素B1，多发生于我国南方高温高湿地区。20世纪60年代，在英国发生的十万只火鸡突发性死亡事件被确认与从巴西进口的花生粕污染黄曲霉毒素有关。1993年世界卫生组织(WHO)将黄曲霉毒素列为1类致癌物，其中黄曲霉毒素B 1是目前自然界中存在的最强的致癌物质，对人类及动物的肝脏有强烈的毒害作用，可诱导急性肝炎、肝癌，严重时可导致死亡。AFB1的降解温度为268℃，传统的蒸煮烹饪无法将其彻底降解。

我国食品安全国家标准《食品中真菌毒素限量》(GB2761-2011)中明确规定玉米、小麦及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的限量标准为1000μg/kg。玉米、小麦及其制品中玉米赤霉烯酮的限量标准为60μg/kg。黄曲霉毒素B1的限量标准涵盖的食品范围较多，包括玉米及其制品、花生及其制品(20μg/kg)；大米及其制品(10μg/kg)；小麦及其制品、豆类、熟制坚果以及调味品(5μg/kg)。

以侧向流动为检测原理的金标卡检测方法已在我国食品以及饲料检测实践中广泛应用。但未见针对同时检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素B1的快速检测试纸条的公开报道。