[发明专利]一种高效制备重组人碱性成纤维细胞生长因子的方法

摘要

本发明涉及一种高效制备重组人碱性成纤维细胞尘长因子(以下简称rh-bFGF)的方法，主要是提高rh-bFGF在大肠杆菌中表达量的方法，属于基因工程领域。其特征在于，对rh-bFGF的编码基因进行重新设计，获得特定的人工突变序列，具体序列如本发明SEQ ID No.1。将该序列的基因克隆到大肠杆菌表达载体，转化大肠杆菌，经培养、诱导可以获得比文献报道水平显著提高的表达效果，目标产物可以达到占全菌蛋白的25％以上。该方法在制备重组人碱性成纤维细胞生长因子的过程中具有很高的实用价值。

主权项

一种采用基因工程方法高效制备重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh‑bFGF)的方法，其主要步骤是：1)人工合成如SEQ ID NO.1所述的人碱性成纤维细胞生长因子的人工编码序列，该序列的5’及3’端还可包含可以接受的限制性核酸内切酶酶切位点保护碱基、限制性核酸内切酶酶切位点、起始密码子和终止密码子；2)采用适当的限制性核酸内切酶酶切上一步骤合成的基因，并采用DNA连接酶连接到同样酶切的可接受的大肠杆菌表达载体，该载体可以是但不限于pBV220、pET系列载体等原核表达载体；3)将步骤2)获得的连接产物转化大肠杆菌获得表达重组人碱性成纤维细胞生长因子的基因工程菌，所述大肠杆菌可以是但不限于JM109、DH5α、BL21等大肠杆菌；4)步骤3)获得的大肠杆菌经过诱导表达、发酵，菌体中的目标产物可以达到全菌蛋白的25％以上，然后经提取纯化，获得重组人碱性成纤维细胞生长因子原料。