[发明专利]一种拟穴青蟹基于微卫星标记的系谱认证方法无效
| 申请号： | 201210273613.3 | 申请日： | 2012-08-02 |
| 公开（公告）号： | CN102816843A | 公开（公告）日： | 2012-12-12 |
| 发明（设计）人： | 马洪雨;马群群;马凌波;马春艳;乔振国 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院东海水产研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人： | 黄志达;谢文凯 |
| 地址： | 200090 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种拟穴青蟹基于微卫星标记的系谱认证方法，包括：（1）基因组DNA提取；（2）微卫星引物的PCR扩增；（3）扩增产物的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳；（4）家系区分。本发明能够克服物理标记的不足，可准确、有效区分拟穴青蟹不同家系来源的个体，适用于家系选育中鉴定混合养殖的多家系来源的不同个体，将促进拟穴青蟹人工选育工作健康、快速发展，具有良好的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 拟穴青蟹 基于 卫星 标记 系谱 认证 方法 | ||
【主权项】：
一种拟穴青蟹基于微卫星标记的系谱认证方法，包括：（1）取拟穴青蟹肌肉组织100‑150mg，置于500~600μl组织提取液中剪碎，加入终浓度为20~25mg/ml的蛋白酶K和终浓度为100~110μg/ml的RNase A，55~60℃下消化2‑3个小时；用混合液抽提，然后用组织提取液2倍体积的无水乙醇沉淀DNA，再经乙醇洗涤和自然干燥后，溶解于50~60μl TE缓冲液中；最后将DNA浓度稀释为100～110ng/μl，并保存在‑20℃备用；（2）采用微卫星引物对上述得到的待检测个体的DNA进行PCR扩增；（3）采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离PCR扩增产物，对PCR扩增产物进行染色和显色，根据扩增产物的不同迁移距离确定拟穴青蟹个体的基因型；（4）利用软件对上述拟穴青蟹基因型进行分析得到聚类图谱，用以区分拟穴青蟹个体。
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