[发明专利]人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的B细胞表位肽段及其应用

摘要

本发明属于医学领域，特别涉及急性肾损伤的诊断技术，所述人NGAL的B细胞表位肽段及其制备的杂交瘤细胞；B细胞表位肽段、其特异性抗体及特异性抗体的免疫复合物在制备急性肾损伤的诊断试剂中的应用；本发明制备的B细胞表位肽段免疫小鼠制备的单克隆抗体具有纯度高(SDS‑PAGE检测纯度＞96％)、效价高(ELISA效价达1∶256000)、特异性好、可大批量制备等优点；通过本发明制备的单克隆抗体、多克隆抗体可用于病人尿液NGAL含量的检测，如可采用“双抗体夹心”ELISA反应模式，即酶标记人抗NGAL单抗、酶标板包被抗NGAL多抗和被测样品NGAL抗原形成“双抗体夹心”结构进行测定。

主权项

1.人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白NGAL的B细胞表位肽段，其特征在于：所述人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的B细胞表位肽段具有18个氨基酸，其氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，其中所述B细胞表位肽段通过以下方式获得：a)利用Chou&Fasman预测β转角、Emini法预测抗原表面可及性、Karplus&Schulz法预测蛋白柔韧性、Kolaskar&Tongaonkar蛋白质抗原性分析、Parker法蛋白质疏水分析、Bepipred线性抗原表位预测以及通过UniProt数据库中获得NGAL糖基化信息，筛选出B细胞表位特征明显、免疫原性强的肽段；b)从所筛选出的B细胞表位特征明显、免疫原性强的氨基酸的肽段中再选出氨基酸数量不少于15个的目标肽段；c)利用所述目标肽段分别制备单克隆抗体，选择效价和亲和力最理想的单克隆抗体，从而得到与所选的单克隆抗体相对应的肽段，即所述B细胞表位肽段；所述B细胞表位肽段用于制备单克隆抗体。