[发明专利]一种改良Trizol法提取马铃薯块茎总RNA的方法无效
| 申请号： | 201210256346.9 | 申请日： | 2012-07-15 |
| 公开（公告）号： | CN103540585A | 公开（公告）日： | 2014-01-29 |
| 发明（设计）人： | 李立芹;王西瑶;王伟;杨先泉;倪苏;刘帆 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 611130 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明提供一种改良Trizol法提取马铃薯块茎总RNA的方法，该方法的特征在于用常规的Trizol法(Invitrogen公司)提取RNA后，加入苯酚/氯仿/异戊醇(25∶24∶1)进行抽提一次，然后转移上清液至一新管，加入上清液0.7倍体积异丙醇和总体积0.2倍体积1mol/L醋酸钠进行沉淀RNA，所获得的RNA使用1mL 3mol/L醋酸钠(pH＝5.2)和1mL 75％乙醇各清洗一次，最后经过干燥，用DEPC水溶解，这种改良Trizol法提取马铃薯块茎总RNA获得率高，量大，并且质量好、纯度高，可以满足反转录、Northern杂交、基因体外翻译、cDNA文库构建、cDNA末端快速扩增等分子生物学研究。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 改良 trizol 提取 马铃薯 块茎 rna 方法 | ||
【主权项】：
一种改良Trizol法提取马铃薯块茎总RNA的方法，其特征在于以下操作：a、取新鲜块茎约0.1g，加液氮研磨至粉末状，迅速转移到1.5mL离心管中，加入1mL Trizol试剂，充分混匀，25℃静置5min，4℃，12000r/min离心5min，直接倒上清入新1.5mL离心管中，加入200μl氯仿，颠倒混匀，室温静置5min，4℃，12000r/min离心15min，吸取上清至新1.5mL离心管中，加入等体积的异丙醇，上下颠倒混匀，‑20℃沉淀30min；b、4℃，12000r/min离心10min，弃上清，加入1mL 75％乙醇洗沉淀，4℃，8000r/min离心5min，弃上清，加入500μl DEPC水溶解沉淀，再加入500μl苯酚/氯仿/异戊醇(25∶24∶1)，颠倒混匀，4℃，12000r/min离心20min；c、吸取上清至新1.5mL离心管中，加入0.7倍体积异丙醇和0.2倍体积1mol/L醋酸钠，上下颠倒混匀，‑20℃沉淀30min，4℃，12000r/min离心20min，弃上清，加入1mL 3mol/L醋酸钠(PH＝5.2)清洗，4℃，10000r/min离心5min，弃上清，75％乙醇洗沉淀；d、沉淀在超净工作台干燥，加入40μl DEPC水溶解，储存备用。
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