[发明专利]氧化双醛纤维素固定化脲酶的制备方法

摘要

一种氧化双醛纤维素固定化脲酶的制备方法，经过如下两个步骤制成：一是氧化双醛纤维素的制备，其中包括纤维素的活化、水热合成制备氧化双醛纤维素两个子步骤。二是固定化脲酶的制备，其中包括分散相的制备、脲酶的固定化和洗涤干燥三个子步骤。本方法利用自然界广泛存在的纤维素为基质材料，通过水热合成制备得到氧化双醛纤维素载体，利用希夫碱(Schiff base)反应将脲酶固定在此载体上，得到氧化纤维素固定化的脲酶。本发明制备的氧化双醛纤维素醛基含量较高，为脲酶结合提供更多活性位点，固定化脲酶的方法简单易于操作，且载体材料来源广泛，具有广泛的应用前景和实用价值。

主权项

一种氧化双醛纤维素固定化脲酶的制备方法，其特征是按如下步骤进行的：一、氧化双醛纤维素的制备：(1)纤维素的活化：将微晶纤维素或棉纤维置于质量比为12％‑20％的NaOH水溶液中润涨24h，用蒸馏水洗至中性，抽滤后将得到的固体置于30‑40℃烘箱中干燥3h，研磨成粉末备用；(2)纤维素的氧化：将活化后的微晶纤维素或棉纤维与1∶1‑1∶4的重量比的高碘酸或高碘酸钠置于水热合成反应釜中，加入蒸馏水，填充系数为0.6‑0.9，将此密闭的水热合成反应釜置于110‑130℃烘箱中反应4‑10h；反应结束后，滤纸过滤得到固体，并用蒸馏水反复冲洗该固体4‑5次，抽滤后将固体置于30‑40℃烘箱干燥3h后研磨成粉备用；将干燥得到的产物再进行一次相同方法的选择性氧化反应，即得氧化双醛纤维素，再将氧化双醛纤维素置于30‑40℃烘箱中干燥3h后放入4℃冰箱中保存；二、固定化脲酶的制备：(1)分散相的制备：取步骤一(2)得到的氧化双醛纤维素载体，加入pH4‑10的磷酸盐缓冲液制备分散相；控制氧化双醛纤维素在此分散相中的质量比为3％‑5％；(2)脲酶的固定：向分散相中加入脲酶溶液，其中脲酶溶液浓度为0.1‑20mg/mL，控制反应温度2‑8℃，磁力搅拌2‑4h；(3)洗涤干燥：用纱布过滤得到固体，将此固体用去离子水 洗涤4‑5次，除去未固定的游离脲酶，真空冷冻干燥得到固定化的脲酶。