[发明专利]测定Hib结合疫苗中高分子结合物含量的方法

摘要

本发明公开了一种测定Hib结合疫苗中高分子结合物含量的方法，它通过脱氧胆酸钠在酸性条件下形成胶团并吸附沉淀蛋白质的特性，使结合态多糖与游离态多糖分离，再通过50%乙醇水溶液溶解出低分子结合物，以实现对高分子结合物的分离测定。

主权项

测定Hib结合疫苗中高分子结合物含量的方法，其特征在于，它包括以下步骤：A．取多糖含量为20～30μg/mL的待测Hib结合疫苗样品3.0mL，作为样品1；B．取多糖含量为20～30μg/mL的待测Hib结合疫苗样品3.0mL，并配置1%脱氧胆酸钠溶液200μL，将两种溶液混合并冰浴30min，制备得到混合液；C．向混合液中加入0.1mol/L盐酸溶液200μL，搅拌混合均匀后，于温度4℃转速6000~7000rpm条件下离心30min，收集上清液作为样品2；D．取步骤C中所得沉淀，加入50%乙醇1.0mL放置1～2h，再加入50%乙醇2.0mL放置1～2h，于6℃转速7500~8500rpm条件下离心1h，取2.7mL上清液作为样品3；E．取步骤D中所得沉淀，加入0.5mol/L的氢氧化钠溶液0.5mL，放置1h，再加入1.5mL的水，作为样品4；F．分别量取1.0mL样品1、1.0mL样品2、0.5mL样品3和0.5mL样品4各两份作为平行样，将样品矿化后以4μg/mL的磷对照品溶液为标准测定各样品中的磷含量；G．计算样品的磷含量、实验的有效性以及待测Hib结合疫苗样品的高分子结合物含量，计算公式如下：P1=(A1×3)/1.0P2=(A2×3.4)/1.0P3=(A3×3.0)/0.5P4=(A4×2.3)/0.5‑(P3×0.3)/3.0试验有效性=P1/(P2+P3+P4) ×100%高分子结合物含量=P4/(P2+P3+P4)×100%P1、P2、P3和P4分别表示样品1、样品2、样品3和样品4的磷含量(μg/mL)；A1、A2、A3和A4分别表示样品1、样品2、样品3和样品4矿化后的磷含量(μg)。