[发明专利]一种以玉米芯为主要原料发酵产纤维素酶的方法

摘要

本发明提供了一种以玉米芯为主要原料发酵产纤维素酶的方法，采用的发酵菌株是2012年6月5日保存于中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC M 2012204的木酶属里氏木酶(Trichoderma reesei)QZ‑5菌株，该发明的特点是以农产品废弃物一玉米芯为主要原料发酵生产制备纤维素酶，采用国际理论应用化学协会(IUPAC)推荐的国际标准方法测定酶活，即滤纸酶活力FPA法测定，发酵制备的纤维素酶最高酶活可达8IU/ml以上，成本低廉且可变废为宝，简便易行。所产纤维素酶可广泛应用于纺织、造纸、饲料、食品等领域，属于生物技术领域。

主权项

一种以玉米芯为主要原料发酵产纤维素酶的方法，其特征是采用2012年6月5日保存于中国典型培养物保藏中心保藏编号为：CCTCC M 2012204的里氏木霉(Trichoderma reesei)QZ‑S为发酵菌株，以农产品废弃物玉米芯为主要原料在7升发酵罐中发酵生产制备纤维素酶，步骤为：1)种子培养基：葡萄糖15g/L，酵母浸膏6g/L，(NH4)2SO4 2.2g/L，KH2PO4 4g/L，MgSO47H2O 0.6g/L，CaCl2 0.6g/L，每个250ml三角瓶中装50ml，用磷酸盐调pH＝5.0，8层纱布封口，115℃灭菌30分钟，冷却；2)接种：在无菌超净台上，取斜面菌种一支，加入0.9％的生理盐水10ml，用竹签刮下培养基上的孢子，即为菌种孢子液；取1ml菌种孢子液放入含50ml种子培养基的250ml的三角瓶中，置于摇床；培养条件：转速200rpm，温度28℃，恒温培养50小时，即为发酵产酶的种子液；3)发酵产酶培养基：玉米芯20g/L，玉米浆12g/L，(NH4)2SO4 1.2g/L，KH2PO42g/L，MgSO47H2O0.2g/L，CaCl20.2g/L，用磷酸盐调pH＝5.0，装入发酵罐，并按每升发酵产酶培养基加0.4ml消泡剂的比例加消泡剂，121℃灭菌30分；玉米芯需先粉碎成粉末；4)发酵产酶：将培养好的种子液按发酵产酶培养基10％的接种量，接种到发酵罐中，控制发酵温度28℃，搅拌转速200rpm，通气量1.3L/min/L，发酵培养6天；5)发酵产酶及酶液提取：取出的发酵液8000rpm离心10min，收集上清液即为酶液；工业生产中，采用板框压滤获取酶液；6)酶活的测定方法：采用国际理论应用化学协会(IUPAC)推荐的国际标准方法测定酶活，即滤纸酶活力FPA测定。