[发明专利]一种胶原基骨软骨三层复合物及其制备方法

摘要

本发明公开了一种胶原基骨软骨三层复合物及其制备方法，所述复合物按如下方法制备：在模具中依次注入胶原-磷酸盐混合溶液，5~20mg/mL胶原水溶液和35~45mg/mL的胶原水溶液，形成致密胶原-多孔胶原-胶原水溶性磷酸盐复合物，将该复合物经无水乙醇、钙盐的无水乙醇溶液浸没处理后，再用EDC-NHS的MES溶液进行交联处理，获得所述胶原基骨软骨三层复合物；本发明方法提高三层支架的界面结合性能，防止骨软骨修复过程中出现层与层之间分裂的不良后果。

主权项

一种胶原基骨软骨三层复合物，其特征在于所述复合物按如下方法制备：（1）在模具中注入胶原‑磷酸盐混合溶液，‑20~‑80℃冷冻4~24h，再注入5~20mg/mL胶原水溶液，0~8℃条件下静置1~15min后于‑20~‑80℃冷冻4~24h，最后注入35~45mg/mL的胶原水溶液，0~8℃条件下中静置1~15min后于‑20~‑80℃冷冻4~24h，去除模具，获得致密胶原‑多孔胶原‑胶原水溶性磷酸盐复合物；所述胶原为水溶性Ⅰ型胶原，所述胶原‑磷酸盐混合溶液是将可溶性磷酸盐与10~60mg/mL胶原水溶液混合配制而成，所述可溶性磷酸盐与10~60mg/mL胶原水溶液中胶原的质量比为1~3:1；所述胶原‑磷酸盐混合溶液、5~20mg/mL胶原水溶液与35~45mg/mL的胶原水溶液的注入体积比为2~6:2~5:1；（2）将步骤（1）获得的致密胶原‑多孔胶原‑胶原水溶性磷酸盐复合物迅速放入‑20~0℃预冷2~24h的无水乙醇a中，0~10℃浸没反应2~10min，去除无水乙醇a后迅速放入‑20~0℃预冷2~24h的0.05~0.5mol/L钙盐的无水乙醇溶液中，0~40℃浸没反应12~48h，去除反应液，获得致密胶原‑多孔胶原‑胶原纳米羟基磷灰石复合物；（3）在4~28℃、20~40rpm条件下将步骤（2）获得的致密胶原‑多孔胶原‑胶原纳米羟基磷灰石复合物在无水乙醇b中浸没2~48h，去除无水乙醇b后加入EDC终浓度为4mg/mL的EDC‑NHS的MES溶液，在4~28℃、20~40rpm条件下浸没2~8h进行交联，交联结束后去除EDC‑NHS的MES溶液，再用pH为7.4~9.0的缓冲液于4~28℃条件下浸没处理12~48h，去除缓冲液后水洗，冷冻干燥，获得所述胶原基骨软骨三层复合物；所述EDC‑NHS的MES溶液为1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨丙基)‑碳化二亚胺和N‑羟基琥珀酰亚胺以4：1的质量比溶于浓度为10~50g/L，pH=5~7.5的2‑吗啉乙磺酸的水溶液制备的蛋白交联剂溶液，所述蛋白交联剂溶液中EDC的终浓度为4mg/mL。