[发明专利]一种诱导红豆杉种子种胚获得愈伤组织和悬浮细胞的方法有效
申请号: | 201210201775.6 | 申请日: | 2012-06-19 |
公开(公告)号: | CN102715085A | 公开(公告)日: | 2012-10-10 |
发明(设计)人: | 熊兴耀;李炎林;石梦蝶;秦宇;张家银 | 申请(专利权)人: | 湖南农业大学 |
主分类号: | A01H4/00 | 分类号: | A01H4/00 |
代理公司: | 长沙市融智专利事务所 43114 | 代理人: | 袁靖 |
地址: | 410128 *** | 国省代码: | 湖南;43 |
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摘要: | 本发明公开了一种诱导红豆杉种子种胚获得愈伤组织和悬浮细胞的方法。包括:(1)种子外种皮剥离;(2)外植体消毒;(3)种子预处理:用无菌水密封常温浸种1-5天;(4)分离合子胚;(5)愈伤组织的诱导;(6)愈伤组织的继代培养;(7)愈伤组织的悬浮培养:挑取生长势好的淡黄色合子胚细胞系,转入液体培养基中进行悬浮培养,获得红豆杉合子胚愈伤组织悬浮细胞。本发明具有简便、快速获取红豆杉愈伤组织以及利用该愈伤组织给红豆杉的细胞悬浮培养提供原料或者进一步筛选高产紫杉醇细胞株提供优质筛选材料的特点,能节省大量的人力、物力、提高劳动效率。 | ||
搜索关键词: | 一种 诱导 红豆杉 种子 获得 组织 悬浮 细胞 方法 | ||
【主权项】:
一种诱导红豆杉种子种胚获得愈伤组织的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)种子种胚的剥离:将南方红豆杉种子(Taxales chinensis var.mairei)从外种皮中剥离出来;(2)外植体消毒:取步骤(1)得到的种子,用70%的酒精和0.1%的氯化汞表面消毒,再用无菌水清洗;(3)种子的预处理:将步骤(2)得到的种子用无菌水浸泡1‑5天后;(4)种子合子胚的分离:在无菌条件下剥取种子的合子胚;(5)愈伤组织的诱导:将步骤(4)获得的合子胚接种于诱导培养基上诱导愈伤组织,所述的诱导培养基为:BLCG培养基+Piculoram 1‑5mg/L+6‑BA 0.5mg/L+蔗糖20g/L+琼脂7g/L;诱导条件为24±1℃条件下暗培养。
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