[发明专利]一种诱导红豆杉种子种胚获得愈伤组织和悬浮细胞的方法

权利要求书

1.一种诱导红豆杉种子种胚获得愈伤组织的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）种子种胚的剥离：将南方红豆杉种子（Taxales chinensis var.mairei）从外种皮中剥离出来；

（2）外植体消毒：取步骤（1）得到的种子，用70%的酒精和0.1%的氯化汞表面消毒，再用无菌水清洗；

（3）种子的预处理：将步骤（2）得到的种子用无菌水浸泡1-5天后；

（4）种子合子胚的分离：在无菌条件下剥取种子的合子胚；

（5）愈伤组织的诱导：将步骤（4）获得的合子胚接种于诱导培养基上诱导愈伤组织，所述的诱导培养基为：BLCG培养基+Piculoram 1-5mg/L+6-BA 0.5mg/L+蔗糖20g/L+琼脂7g/L；诱导条件为24±1℃条件下暗培养。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

所述步骤（1）中的南方红豆杉种子为当年生或者4℃保存1-2年的南方红豆杉种子。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

所述步骤（2）清洗消毒过程具体如下：先将去除外种皮的种子放入无菌的容器中，在超净工作台内依次经70%酒精消毒90s和0.1%氯化汞消毒12min，无菌水冲洗5次后备用。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

所述步骤（3）种子预处理具体过程如下：将去掉外种皮的种子经过步骤（2）的表面消毒处理后，用无菌的蒸馏水在室温条件下无菌密封浸泡1-5天。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

步骤（5）得到的愈伤组织进行继代培养，具体条件为：继代培养的培养基为BLCG培养基+picloram 1-3mg/L+6-BA 0.5-1.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂7g/L，pH值调至5.8～6.0，培养条件为24±1℃条件下暗培养。

6.一种诱导红豆杉种子种胚获得悬浮细胞的方法，其特征在于，挑取由权利要求5所述的方法培养得到的淡黄色愈伤组织，转入液体培养基中进行悬浮培养，获得悬浮细胞。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，挑取由权利要求5所述的方法继代培养10d得到的淡黄色膨松的愈伤组织进行悬浮培养，培养基为：BLCG培养基或者B5培养基+picloram 1-3mg/L+6-BA 0.5-1.0mg/L+蔗糖20g/L，pH值调至5.8～6.0，培养条件为24±1℃条件下暗培养，摇床转速为100-120rpm/min。