[发明专利]高效裂解大肠杆菌的裂菌制剂及其裂解方法、用途

摘要

本发明公开了一种高效裂解大肠杆菌的裂菌制剂及其裂解方法、用途。设计引物，采用PCR扩增溶原性大肠杆菌中诱导的裂解性噬菌体的裂解酶基因，获得目的片段，再将目的片段与pET-28a（+）载体连接，得到重组表达质粒，导入大肠杆菌BL21（DE3）表达，获得阳性转化子，通过诱导，表达重组的融合蛋白，纯化诱导得纯化的重组蛋白，筛选具有裂解活性的重组表达蛋白，即得所述裂菌制剂。所述裂解方法为pH 8.0，37℃，采用的还原剂为质量百分比浓度为0.8%的β-巯基乙醇或10mM的半胱氨酸，缓冲液为20mM pH5.2醋酸钠缓冲液。本发明获得的裂菌制剂对多种血清型大肠杆菌的裂解特异性强、裂解效率高，可有效杀灭大肠杆菌。

主权项

一种高效裂解大肠杆菌的裂菌制剂，其特征在于，所述裂菌制剂是通过如下方法制备而得的：步骤一，通过噬菌体诱导的方法，诱导大肠杆菌溶原菌株，获得裂解性噬菌体颗粒，纯化得到噬菌体，提取噬菌体的DNA；步骤二，设计引物，以步骤一所得DNA为模板，应用PCR扩增相应的基因片段；步骤三，采用原核表达系统pET‑28a（+），将步骤二扩增所得DNA构建重组质粒；步骤四，将步骤三的重组质粒转化到表达菌BL21（DE3），筛选阳性转化子进行蛋白的诱导表达和鉴定，获得重组蛋白；步骤五，纯化诱导表达的重组蛋白，筛选具有裂解活性的重组表达蛋白，得到蛋白制剂，即高效裂解大肠杆菌的裂菌制剂。