[发明专利]哈茨木霉T28抑菌成分防治致病疫霉菌制剂的制备方法

摘要

本发明涉及一种哈茨木霉T28抑菌成分防治致病疫霉菌制剂的制备方法，采用PD培养基进行液体发酵，获得T28发酵液将发酵液过滤、冷冻离心、经0.22μm滤头过滤后，经乙醇浸浓缩后加入不同极性的有机溶剂分步骤进行提取（乙醚、乙酸乙酯），将乙酸乙酯层以50℃真空旋转蒸发浓缩至黄色粉末挂壁；得到抑菌活性成分并溶于10%的吐温80溶液，得到制剂。本发明采用的原料为可再生的菌物资源，来源丰富、价廉，对由致病疫霉引起的马铃薯晚疫病具有显著的抑制效果，本发明具有高效、低毒、无公害等特点，对防治由致病疫霉引起的马铃薯晚疫病具有广泛的应用前景。

主权项

一种哈茨木霉T28抑菌成分防治致病疫霉菌制剂的制备方法，其特征在于：哈茨木霉T28发酵液的制备：（1）采用改良马铃薯葡萄糖(PD)液体培养基，培养基按比例组成为：马铃薯100g‑200g、葡萄糖10g‑20g、KH2PO42g‑3g、MgSO41g‑2g、水500ml‑1000ml，发酵液pH5.0‑6.0，进行液体发酵培养5‑10天，接种量为发酵液体积的1%‑2%，装液量为锥形瓶容积的35%，发酵培养条件为，温度25℃‑30℃，摇床转数125r/min‑150r/min；（2）哈茨木霉T28发酵液中抑菌活性成分提取：将培养5‑10天的哈茨木霉菌株T28发酵液用无菌纱布过滤，置于冷冻离心机中，在之后用0.22μm的滤头过滤，将滤液200ml加入800ml95%的分析乙醇浸提3h‑5h，水浴加热至50℃，搅拌、加速溶解，将滤液和乙醇的混合溶液浓缩至200ml，加入沸点为60℃的石油醚800ml浸提2h‑5h并用分液漏斗分离两部分溶剂，将水层与1000ml乙醚混合，常温下静止放置2h‑5h，分液漏斗过滤，将水层与1000ml乙酸乙酯混合，在常温下静止放置2h‑5h，分液漏斗过滤，弃水层，将乙酸乙酯层以50℃真空旋转蒸发浓缩，直至液体全部蒸发干，圆底烧瓶底部有黄褐色粉末挂壁；得到抑菌活性成分；（3）哈茨木霉T28发酵液中抑菌成分制剂的制备：将抑菌活性成分用10%吐温80溶液溶解，恢复为原发酵液过滤液体积的1/10。