[发明专利]一种磁性夹心纳米免疫传感器的制备方法及其应用

摘要

本发明公开了一种磁性夹心纳米免疫传感器的制备方法及其应用，特点是包括将胶体金溶液与硅烷化四氧化三铁混合搅拌至溶液无色透明，外加磁铁磁性分离后，得到Fe3O4/Au胶纳米磁珠的步骤；Fe3O4/Au胶纳米磁珠的负载辣根过氧化物酶和被测物二抗得到二抗探针Fe3O4/Au-HRP-Ab2的步骤；玻碳电极电沉积金后再负载被测物一抗，蛋白封闭非特异性活性位点后得到Ab1/Au/GCE电极的步骤；最后将Ab1/Au/GCE电极负载抗原，再结合二抗探针得到夹心免疫传感器的步骤；该磁性夹心纳米免疫传感器可用于测定食物中三聚氰胺、苏丹红、瘦肉精或雌激素的浓度，优点是检测速度快、准确性和灵敏度高，低成本。

主权项

一种磁性夹心纳米免疫传感器的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）二抗探针的制备a. Fe3O4/Au胶纳米磁珠制备将100mL 的0.01wt%氯金酸置于烧杯中加热，煮沸后迅速加入2.5mL的1wt%柠檬酸三钠，继续煮沸10min直至溶液变为深红色，轻微搅拌冷却后得到胶体金溶液；将0.2g 的四氧化三铁加入90mL的 50wt%乙醇溶液中超声分散均匀后，加入300uL的3‑巯丙基三乙氧基硅烷和500uL 氨水，60℃恒温水浴，通N2保护，反应6h后，用0.1mol/L 盐酸洗6次，每次至少1h，再用乙醇和去离子水分别洗涤3次，得到硅烷化四氧化三铁；将上述的得到胶体金溶液与硅烷化四氧化三铁混合，轻微搅拌至溶液无色透明，外加磁铁磁性分离后，用去离子水水洗，真空干燥后得到Fe3O4/Au胶纳米磁珠；b. 二抗探针Fe3O4/Au‑HRP‑Ab2的制备将Fe3O4/Au胶纳米磁珠加入水中，超声波震荡，得到1.0mg/mL 的Fe3O4/Au纳米悬浮液，将Fe3O4/Au纳米悬浮液用0.1M NaCO3调pH至8.2，加入体积分别为Fe3O4/Au纳米悬浮液1/5的1.0mg/mL辣根过氧化物酶和10μg/mL 被测物二抗，4℃搅拌24h，外加磁铁磁性分离后，用去离子水水洗3次，再加入与Fe3O4/Au纳米悬浮液等体积的pH 7.4含1wt%牛血清蛋白的磷酸盐缓冲液分散后，得到二抗探针溶液；（2）电极修饰及抗体结合a. 电极修饰采用γ‑Al2O3抛光的玻碳电极作为工作电极，依次在去离子水和乙醇中超声5min，然后将玻碳电极置于0.08mM氯金酸中，在室温，‑0.5V的电压下电沉积金15s，用去离子水洗净后，得到Au/GCE电极；b. 抗体结合将20μL的0.5 mg/mL被测物一抗滴至Au/GCE电极表面，4℃温育2h后，将未结合在工作电极表面的被测物一抗用磷酸盐缓冲液轻微冲洗掉，然后将20μL的3wt%牛血清蛋白的磷酸盐缓冲液滴至工作电极表面，室温温育1h，封闭非特异性活性位点，将工作电极表面用磷酸盐缓冲液轻微冲洗，洗净剩余的牛血清蛋白，获得牛血清蛋白封闭的Ab1/Au/GCE电极； （3）磁性夹心纳米免疫传感器的组装 将Ab1/Au/GCE电极置于被测物抗原溶液中，室温下温育0.2‑1h后，用磷酸盐缓冲液轻微冲洗，再将Ab1/Au/GCE电极置于20μL二抗探针溶液中，室温下温育0.2‑1h，用磷酸盐缓冲液轻微冲洗后，即组装成夹心免疫传感器。