[发明专利]一种磁性夹心纳米免疫传感器的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种磁性夹心纳米免疫传感器的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）二抗探针的制备

a. Fe₃O₄/Au胶纳米磁珠制备

将100mL 的0.01wt%氯金酸置于烧杯中加热，煮沸后迅速加入2.5mL的1wt%柠檬酸三钠，继续煮沸10min直至溶液变为深红色，轻微搅拌冷却后得到胶体金溶液；将0.2g 的四氧化三铁加入90mL的 50wt%乙醇溶液中超声分散均匀后，加入300uL的3-巯丙基三乙氧基硅烷和500uL 氨水，60℃恒温水浴，通N₂保护，反应6h后，用0.1mol/L 盐酸洗6次，每次至少1h，再用乙醇和去离子水分别洗涤3次，得到硅烷化四氧化三铁；将上述的得到胶体金溶液与硅烷化四氧化三铁混合，轻微搅拌至溶液无色透明，外加磁铁磁性分离后，用去离子水水洗，真空干燥后得到Fe₃O₄/Au胶纳米磁珠；

b. 二抗探针Fe₃O₄/Au-HRP-Ab₂的制备

将Fe₃O₄/Au胶纳米磁珠加入水中，超声波震荡，得到1.0mg/mL 的Fe₃O₄/Au纳米悬浮液，将Fe₃O₄/Au纳米悬浮液用0.1M NaCO₃调pH至8.2，加入体积分别为Fe₃O₄/Au纳米悬浮液1/5的1.0mg/mL辣根过氧化物酶和10μg/mL 被测物二抗，4℃搅拌24h，外加磁铁磁性分离后，用去离子水水洗3次，再加入与Fe₃O₄/Au纳米悬浮液等体积的pH 7.4含1wt%牛血清蛋白的磷酸盐缓冲液分散后，得到二抗探针溶液；

（2）电极修饰及抗体结合

a. 电极修饰

采用γ-Al₂O₃抛光的玻碳电极作为工作电极，依次在去离子水和乙醇中超声5min，然后将玻碳电极置于0.08mM氯金酸中，在室温，-0.5V的电压下电沉积金15s，用去离子水洗净后，得到Au/GCE电极；

b. 抗体结合

将20μL的0.5 mg/mL被测物一抗滴至Au/GCE电极表面，4℃温育2h后，将未结合在工作电极表面的被测物一抗用磷酸盐缓冲液轻微冲洗掉，然后将20μL的3wt%牛血清蛋白的磷酸盐缓冲液滴至工作电极表面，室温温育1h，封闭非特异性活性位点，将工作电极表面用磷酸盐缓冲液轻微冲洗，洗净剩余的牛血清蛋白，获得牛血清蛋白封闭的Ab1/Au/GCE电极；

 （3）磁性夹心纳米免疫传感器的组装

 将Ab1/Au/GCE电极置于被测物抗原溶液中，室温下温育0.2-1h后，用磷酸盐缓冲液轻微冲洗，再将Ab1/Au/GCE电极置于20μL二抗探针溶液中，室温下温育0.2-1h，用磷酸盐缓冲液轻微冲洗后，即组装成夹心免疫传感器。

2.根据权利要求1所述的一种磁性夹心纳米免疫传感器的制备方法，其特征在于：所述的被测物为三聚氰胺、苏丹红、瘦肉精或雌激素。

3.一种根据权利要求1所述的磁性夹心纳米免疫传感器的应用，其特征在于：所述的磁性夹心纳米免疫传感器可用于测定食物中三聚氰胺、苏丹红、瘦肉精或雌激素的浓度。