[发明专利]一种胸水分离肺癌细胞的方法无效
| 申请号： | 201210143772.1 | 申请日： | 2012-05-10 |
| 公开（公告）号： | CN102676456A | 公开（公告）日： | 2012-09-19 |
| 发明（设计）人： | 顾爱琴;刘蕾;李榕;孙磊;姚明 | 申请（专利权）人： | 上海市胸科医院 |
| 主分类号： | C12N5/09 | 分类号： | C12N5/09 |
| 代理公司： | 上海衡方知识产权代理有限公司 31234 | 代理人： | 李泰敏 |
| 地址： | 200030 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种胸水分离肺癌细胞的方法，包括：（1）不同浓度Percoll溶液的制备、（2）胸水悬液的制备、（3）不连续密度梯度Percoll层的制备、（4）离心、（5）取样以及（6）细胞培养。本发明的方法具有简单、稳定、成本低、效果好的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 水分 肺癌 细胞 方法 | ||
【主权项】：
一种胸水分离肺癌细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）不同浓度Percoll溶液的制备: 先用9份Percoll与1份8.5％ NaCl或1.5M PBS混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液稀释到60~70%wt、40~50%wt；（2） 胸水悬液的制备：胸水样本1500rpm离心5分钟，弃上清，1% PBS清洗一遍，1500rpm离心5分钟，弃上清，1%PBS重悬；此时胸水悬液中含多种细胞成分以及细胞组织碎片；（3）不连续密度梯度Percoll层的制备：60~70%wt、40~50%wt、胸水悬液按照1：1：1的比例由高密度向低密度逐层配置，形成3个密度梯度；（4）离心：2800‑3200rpm离心25‑40min；（5）取样：所要分离的细胞位于两层界面，小心地吸取中间细胞层，1% PBS清洗1遍，1500rpm离心5min，弃上清，收获细胞；以及（6）细胞培养：获得的细胞用10%FBS 的DMEM常规培养。
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