[发明专利]一种胸水分离肺癌细胞的方法

权利要求书

1.一种胸水分离肺癌细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）不同浓度Percoll溶液的制备: 先用9份Percoll与1份8.5％ NaCl或1.5M PBS混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液稀释到60~70%wt、40~50%wt；

（2）  胸水悬液的制备：胸水样本1500rpm离心5分钟，弃上清，1% PBS清洗一遍，1500rpm离心5分钟，弃上清，1%PBS重悬；此时胸水悬液中含多种细胞成分以及细胞组织碎片；

（3）不连续密度梯度Percoll层的制备：

60~70%wt、40~50%wt、胸水悬液按照1：1：1的比例由高密度向低密度逐层配置，形成3个密度梯度；

（4）离心：2800-3200rpm离心25-40min；

（5）取样：所要分离的细胞位于两层界面，小心地吸取中间细胞层，1% PBS清洗1遍，1500rpm离心5min，弃上清，收获细胞；以及

（6）细胞培养：获得的细胞用10%FBS 的DMEM常规培养。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中所述的生理溶液为0.85％WT NaCl或0.15M PBS。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述Percoll溶液的浓度为60%wt、40%wt。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）中每个梯度3ml，共9ml，由下至上加入10ml离心管，根据胸水悬液的多少确定多少离心管。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（4）中所述的离心为3000rpm离心30min。