[发明专利]可视化检测探针及在结核病利福平耐药突变检测中的应用

摘要

本发明公开了一种新型可视化快速灵敏的检测探针及其在结核分枝杆菌利福平耐药突变检测中的应用。本发明可视化检测探针包括：共有的锚定探针A、绝缘探针L和R、突变检测探针B和共有的竞争探针SIB，探针B与和探针SIB具有相同的靶DNA互补区，仅突变位点的碱基种类不同。针对利福平耐药突变，本发明根据结核分枝杆菌利福平耐药的rpoB基因突变核心区所包含的所有突变位点设计合成检测探针簇，探针簇包含8个探针组，每个探针组含一种特定的突变检测探针B，此法设计的各探针组和探针簇对合成的野生型和突变型检测片段有良好的区分性，并能准确检测利福平耐药结核分枝杆菌rpoB基因530-533位氨基酸具体的突变位点。

主权项

一种可视化检测探针，其包括：锚定探针，其3’端含有3段GGG序列参与G‑四链体形成，或其3’端含有1段GGG序列参与G‑四链体形成；竞争探针，其互补区与野生型靶序列完全互补；突变检测探针，其互补区与相应的突变型靶序列完全互补，其5‘端具有1段GGG序列参与G‑四链体形成，或其5‘端具有3段GGG序列参与G‑四链体形成；绝缘探针，包括探针L和探针R，分别能结合在锚定探针靶向区域的下游和突变检测探针靶向区域的上游，和单链靶核酸形成稳定的双链；所述锚定探针的互补区与靶序列上的与突变检测探针互补区段的下游互补，所述锚定探针与突变检测探针结合在相应的突变型靶序列上时，两者之间能够形成G‑四链体。