[发明专利]一种桡足类中纤维二糖酶活力的测定方法

摘要

本发明公开了一种桡足类中纤维二糖酶活力的测定方法，对5-15只桡足类动物在缓冲液下研磨、离心，再与底物纤维二糖水浴反应得到水浴产物，然后水浴产物与Tris-HCl、MgCl2、二硫苏糖醇、己糖激酶、NADP+、ATP、6-磷酸葡萄糖脱氢酶混合进行酶促反应，再以酶促产物中还原型辅酶Ⅱ的吸光值和浮游动物只数为参数，根据公式计算得到每只桡足类动物中纤维二糖酶的活力；本发明的方法只要几只到十几只桡足类动物就可完成消化酶活力的测定，只是对桡足类动物中纤维二糖酶进行水浴和酶促二步反应就可以得出还原型辅酶Ⅱ的吸光值，操作简便，反应时间短，误差也较少，因此本发明具有操作简便，样品量少，测试时间短，测试效率高的优点。

主权项

一种桡足类中纤维二糖酶活力的测定方法，其特征在于步骤如下：a、将5‑15只桡足类动物置于研钵中，加入浓度为1mM的三羟甲基氨基甲烷‑HCl缓冲液500μl，冰浴研磨成匀浆液，在15000 rpm、0‑4℃下，冷冻离心机离心10min，取上清液待用；b、将1mg纤维二糖加入到1毫升浓度为100mM的醋酸溶液中，加热溶解得到纤维二糖醋酸液，取上述上清液80μl与420μl所述纤维二糖醋酸液混匀，在20℃水浴温育2h，然后在95℃水浴2min，终止反应得到水浴产物；c、取上述水浴产物40μl，与1ml浓度为50mM 的三羟甲基氨基甲烷‑HCl缓冲液，0.5ml浓度为1mM的MgCl2液，0.5ml浓度为0.5mM的二硫苏糖醇液，1ml浓度为1μg /ml的己糖激酶液，1ml浓度为30μM的氧化型辅酶Ⅱ液，1ml浓度为300μM的腺嘌呤核苷三磷酸液，1ml浓度为0.02U/ml的 6‑磷酸葡萄糖脱氢酶液混合，搅拌均匀，酶促反应10min，得到含还原型辅酶Ⅱ的酶促产物；d、用移液器吸取上述酶促产物置于荧光分光光度计中，在激发波长为340nm，发射波长为450nm下测量还原型辅酶Ⅱ的吸光值，根据公式0.2737×吸光值 ‑ 0.4518计算得到还原型辅酶Ⅱ的总浓度；e、根据下述公式计算样品中每只浮游动物的纤维二糖酶活力，纤维二糖酶活力= A×6÷833.35×180×500÷80×500÷40÷2÷B，公式中A为还原型辅酶Ⅱ的总浓度，B为桡足类动物的只数。