[发明专利]用分子印迹电化学修饰电极测定果实中赤霉素的方法

摘要

本发明公开了一种用分子印迹电化学修饰电极测定果实中赤霉素的方法。将赤霉素与亚甲基蓝混合，电聚合成膜于玻碳电极表面，洗脱赤霉素后制备出分子印迹电化学传感器。随着分子印迹膜上越来越多的识别位点上的多巴胺标记过的赤霉素被置换出来，氧化峰的电流逐渐下降，据此建立了一种测定痕量赤霉素的电化学分析方法。赤霉素在2.5×10-8～1.05×10-6mol/L浓度范围内与峰电流I呈良好的线性关系。本发明克服了现有技术存在过于复杂等诸多缺点，测定的灵敏度高、测定线性范围宽、检测限低，对于果实中10-8mol/L的赤霉素的检测有良好的效果。

主权项

一种用分子印迹电化学修饰电极测定果实中赤霉素的方法，其特征在于具体步骤为：(1)多巴胺标记赤霉素：取5.0×10‑4mol/L的赤霉素标准溶液0.4～0.6mL于具塞比色管中，加入0.01mol/L的N‑羟基琥珀酰亚胺1～3mL，摇匀，静置5～15min，再加入2.5×10‑3mol/L的多巴胺1～3mL，摇匀后加入0.01mol/L的1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)1～3mL作为脱水缩合剂使赤霉素与多巴胺进行脱水反应；反应15～25min后得到浓度为2.0×10‑5～3.0×10‑5mol/L的多巴胺标记赤霉素标准溶液；(2)分子印迹修饰电极的制备：将已处理干净的工作电极置于含摩尔浓度为5.0×10‑4mol/L的亚甲基蓝单体、摩尔浓度为2.5×10‑4mol/L的赤霉素和摩尔浓度为0.2mol/L、pH＝9.2的硼砂缓冲溶液中进行电化学聚合，以0.2mol/L KCl作为支持电解质，扫描速度100mV/s；在+1.4～‑0.6V范围内循环扫描20～40圈后，将电极从聚合液中取出，经二次水冲洗后，在分析纯甲醇乙酸溶液中泡洗10～50min，以洗脱分子印迹膜中的模板分子赤霉素和其他的一些吸附物，制得分子印迹聚亚甲基蓝修饰电极；(3)检测方法：在室温即25℃下，将步骤(2)制得的分子印迹聚亚甲基蓝修饰电极置于步骤(1)制得的浓度为2.0×10‑5～3.0×10‑5mol/L多巴胺标记赤霉素标准溶液中孵化10～15min，然后用蒸馏水冲洗电极表面；检测时，先将清洗后的电极置于含浓度为2.5×10‑8～1.05×10‑6mol/L的赤霉素的0.2mol/L、pH＝7.0的硼酸缓冲液中进行竞争反应5～15min，随后用循环伏安法和差分脉冲伏安法进行相关的测量；(4)赤霉素含量的测定：随着分子印迹膜上越来越多的识别位点上的多巴胺标记过的赤霉素被置换出来，氧化峰的电流逐渐下降；赤霉素浓度在2.5×10‑8～1.05×10‑6mol/L范围内与峰电流I呈良好的线性关系：I＝‑0.0412C+6.4786，其线性相关系数r＝0.9992；由关系式DL＝3δb/K，测得该分子印迹传感器对赤霉素的检出限为7.348×10‑9mol/L。