[发明专利]非对称多色荧光发夹探针链反应在病原菌检测中的应用

摘要

本发明涉及“非对称多色荧光发夹探针链反应在病原菌DNA检测中的应用”，属于生物技术检测领域。本发明联合非对称发夹探针链反应技术和FRET技术，建立了一种基于非对称多色荧光发夹探针链反应技术的病原菌检测技术。当体系中无靶序列存在时，发夹探针处于亚稳定状态，两基团构成FRET对，无荧光信号产生；而当靶序列加入反应体系触发链式聚合反应时，发夹结构打开，产生荧光信号，并且由于是线性放大，荧光信号强度与靶序列拷贝数成正比。在发明方法将高灵敏的多色荧光共振能量转移技术引入到链式反应中，从而建立一种简单、快速、灵敏的病原菌DNA直接检测方法，克服了原非对称发夹探针进行链式反应时琼脂糖凝胶电泳观察检测结果灵敏度较低的缺陷。

主权项

非对称多色荧光发夹探针链反应在病原菌DNA检测中的应用，包括液相杂交链反应体系，所述反应体系中同时加入有非对称发夹探针1和非对称发夹探针2以及待测靶序列，其中非对称发夹探针1，包括回文序列、两条茎臂和连接于一条茎臂上的粘性末端，所述两条茎臂连接于回文序列的两端且具有互补的核酸序列，所述回文序列为与待测靶序列无关的序列，所述茎臂与其连接的粘性末端具有靶序列的互补核酸序列；其中非对称发夹探针2，包括回文序列、两条茎臂和连接于一条茎臂上的粘性末端，所述两条茎臂连接于回文序列的两端且具有互补的核酸序列，所述回文序列与其相连的一条茎臂具有靶序列，所述另一茎臂上相连的粘性末端具有和非对称发夹探针1中回文序列的互补核酸序列，所述非对称发夹探针1的5’端和3’端分别标记荧光受体分子和荧光供体分子或非对称发夹探针2的5’端和3’端分别标记荧光供体分子和荧光受体分子。