[发明专利]一种以大豆吉林35号胚尖为外植体的高效遗传转化方法无效
| 申请号： | 201210019121.1 | 申请日： | 2012-01-20 |
| 公开（公告）号： | CN102533848A | 公开（公告）日： | 2012-07-04 |
| 发明（设计）人： | 王庆钰;闫帆;王英;李景文;翟莹;孙昕;刘雅婧;陈虹地;赵健如;张鑫生;程浩;杨旭光 | 申请（专利权）人： | 吉林大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H4/00;A01H5/00 |
| 代理公司： | 吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 22100 | 代理人： | 魏征骥 |
| 地址： | 130012 吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种以大豆吉林35号胚尖为外植体的高效遗传转化方法，属于植物转基因技术领域。选取种皮完整无病害的吉林35号大豆种子，将外植体先进行超声波处理，侵染后的胚尖外植体转接到共培养基中，共培养、接入生根培养基，待根长势健壮后移栽至营养钵中。本发明缩短了再生周期，采用了强有效的侵染方式，降低了共培养期间的褐化与坏死程度，提高了转化率。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 大豆 吉林 35 号胚尖 外植体 高效 遗传 转化 方法 | ||
【主权项】：
一种以大豆吉林35号胚尖为外植体的高效遗传转化方法，其特征在于包括下列步骤：（1）选取种皮完整无病害的吉林35号大豆种子，自来水冲洗干净后用75%的酒精处理50s，无菌水冲洗3～5遍，而后浸泡于无菌水中6h并切取外植体胚尖；（2）将外植体先进行超声波处理6s，之后用真空泵辅助农杆菌侵染15min，并于侵染液中添加0.03% Silwet L‑77；（3）侵染后的胚尖外植体转接到共培养基中，共培养基附加3.0 mg﹒L‑1 6‑BA以诱导丛生芽和3.0 mg﹒L‑1 硝酸银以抑制褐化和坏死；（4）共培养3天后移接至丛生芽伸长培养基中，伸长培养基附加0.5 mg﹒L‑1 6‑BA与0.2 mg﹒L‑1 IBA，此阶段添加筛选剂Basta 0.6 mg﹒L‑1；（5）待再生植株长到4.7~5.3cm时，接入生根培养基，生根培养基以蔗糖作为碳源，选用1/2 MSB并附加0.5 mg﹒L‑1 IBA，待根长势健壮后移栽至营养钵中；（6）移栽后提取叶片DNA做PCR检测，并采用bar基因试纸条进行蛋白检测。
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