[发明专利]一种用玉米醇溶蛋白基因RNAi载体提高玉米赖氨酸含量的方法

摘要

本发明公开了一种用玉米醇溶蛋白基因RNAi载体提高玉米赖氨酸含量的方法。属植物基因工程技术领域。该方法是用基因枪法将玉米醇溶蛋白基因RNAi载体导入受体玉米品种，该载体含有胚乳特异表达启动子P-zp22/6，正、反向目的基因22-KD醇溶蛋白基因部分cDNA片段22-KD-P，GUS基因内含子和终止子poly(A)。还提供了另一个玉米醇溶蛋白基因RNAi载体pUC19-RNAi-19KD，该载体含有正、反向目的基因19-KD醇溶蛋白基因部分cDNA片段19-KD-P。将两个RNAi载体分别导入玉米品种，成功获得高赖氨酸含量的玉米转基因植株，赖氨酸含量提高15-60%，转育周期只需1-2年。

主权项

一种用玉米醇溶蛋白基因RNAi载体提高玉米赖氨酸含量的方法，包括用基因枪法将玉米醇溶蛋白基因RNAi载体pUC19‑RNAi‑22KD导入受体玉米品种，所述的玉米醇溶蛋白基因RNAi载体pUC19‑RNAi‑22KD是在骨架载体pUC19上含有胚乳特异表达启动子P‑zp22/6，位于RNAi载体pUC19‑RNAi‑22KD的酶切位点SacⅠ和SmaⅠ间；正向目的基因22‑KD醇溶蛋白基因部分cDNA片段22‑KD‑P位于RNAi载体pUC19‑RNAi‑22KD的酶切位点SmaⅠ和XbaⅠ间；反向目的基因22‑KD醇溶蛋白基因部分cDNA片段22‑KD‑P位于RNAi载体pUC19‑RNAi‑22KD的酶切位点XbaⅠ和XhoⅠ间；在正向目的基因22‑KD醇溶蛋白基因部分cDNA片段22‑KD‑P和反向目的基因22‑KD醇溶蛋白基因部分cDNA片段22‑KD‑P中间含有GUS基因内含子，位于RNAi载体pUC19‑RNAi‑22KD的XbaⅠ酶切位点间；终止子poly(A)位于RNAi载体pUC19‑RNAi‑22KD酶切位点HindⅢ和XhoⅠ间；所述胚乳特异表达启动子zp22/6的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述22‑KD醇溶蛋白基因部分cDNA片段22‑KD‑P 的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示，所述GUS基因内含子的核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示，所述终止子poly(A)的核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示，所述玉米醇溶蛋白基因RNAi载体pUC19‑RNAi‑22KD的核苷酸序列如SEQ ID NO:15所示。