[发明专利]发酵法制取乙醛脱氢酶的一种方法

摘要

本发明公开了一种发酵法制取乙醛脱氢酶的工艺，以啤酒酵母LY01为出发菌株，将发酵后获得的菌丝体进行破壁、离心后得到粗酶液，用硫酸铵分级沉淀和双水相体系萃取处理粗酶液，收集萃取后富集乙醛脱氢酶的PEG相，然后经超滤膜浓缩，冷冻干燥后得到纯度大于40％的乙醛脱氢酶。本发明具有操作简便、操作时间短、纯化效果较好、提取率高等特点，易于连续化生产和工业化生产。

主权项

一种发酵法制取乙醛脱氢酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)发酵培养：以啤酒酵母LY01为出发菌株，将培养好的种子液按一定的接种量接入发酵培养基中，在一定的温度下进行发酵培养；2)破壁处理：将培养成熟的啤酒酵母离心，菌体用无菌水洗涤1～3次，之后用磷酸缓冲液(pH7.0～7.5)制成菌悬液，菌体的质量比浓度为10％～20％；将上述菌悬液置于4～6℃，用低温高压细胞破碎仪破碎；3)高速离心：将细胞破碎后，以4℃、5000～10000r/min离心5～15min，收集上清液，即粗酶液；4)硫酸铵分级沉淀：将粗酶液先用20～40％饱和度的硫酸铵沉淀，留取上清液，再将其上清液用80～90％饱和度的硫酸铵沉淀，去掉上清液，将沉淀物用0.01～0.2mol/L磷酸缓冲液(pH7.0～7.5)溶解；5)双水相萃取：双水相体系中含有粗酶液、PEG、(NH4)2SO4，体系混匀后于4℃、5000～10000r/min离心5～15min，乙醛脱氢酶集中在上相(PEG相)；6)膜过滤：将PEG相进行超滤，除去PEG、盐离子，实现浓缩，同时回收PEG；7)真空冷冻干燥：将超滤浓缩液进行冷冻干燥、粉碎，即得纯度大于40％的乙醛脱氢酶。