[发明专利]诱导人脐带间充质干细胞分化为睾丸间质细胞的方法与应用

摘要

本发明公开了一种诱导人脐带间充质干细胞分化为睾丸间质细胞的方法与应用。该方法包括如下步骤：首先将小鼠类固醇生成因子-1基因克隆入腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV-EGFP，得到重组载体pAdtrack-CMV-SF-1；然后将重组载体pAdtrack-CMV-SF-1与腺病毒载体质粒pAdEasy-1重组，得到携带SF-1基因的腺病毒质粒pAd-SF-1；将腺病毒质粒pAd-SF-1单酶切线性化，经人胚肾细胞AD-293包装后得到腺病毒；再将该腺病毒加入到诱导培养液中感染人脐带间充质干细胞，将人脐带间充质干细胞诱导分化为睾丸间质细胞。经过本发明所述方法的诱导，人脐带间充质干细胞在体外可以分化为睾丸间质细胞，需时仅为1周，从而为采用细胞替代或者基因方法治疗睾酮缺乏症提供了重要的细胞来源。

主权项

一种诱导人脐带间充质干细胞分化为睾丸间质细胞的方法，其特征在于包含以下步骤：(1)将核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的SF‑1基因插入腺病毒的穿梭质粒pAdtrack‑CMV‑EGFP的多克隆位点中，得到重组载体pAdtrack‑CMV‑SF‑1；然后将重组载体pAdtrack‑CMV‑SF‑1与腺病毒载体质粒pAdEasy‑1共转染大肠杆菌BJ5183，得到携带SF‑1基因的腺病毒质粒pAd‑SF‑1；将腺病毒质粒pAd‑SF‑1单酶切线性化，转染人胚肾细胞AD‑293后得到腺病毒；(2)采用MOI＝200的量，将步骤(1)制备得到的腺病毒加入到诱导培养液中感染人脐带间充质干细胞，将人脐带间充质干细胞诱导分化为睾丸间质细胞；诱导培养液的组成为：基础培养基为DMEM/F12，含有体积百分比10％胎牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素、500μM二丁酰环磷酸腺苷。