[发明专利]一种检测大熊猫粪样中西氏贝蛔虫虫卵的PCR法

摘要

本发明公开一种检测大熊猫粪样中西氏贝蛔虫虫卵的PCR法，包括设计上游引物和下游引物、提取虫卵DNA、PCR扩增和结果检查四个步骤。本方法在DNA抽提前处理虫卵，以100℃沸水和液氮反复冻融的方式代替通常的研磨，可在显微镜下可观察到虫卵蛋白质外壳破裂，使DNA暴露出来，便于抽提，尽可能减少DNA在抽提过程中的损耗。同时，本发明提供了两种PCR扩增引物。与现有技术相比，本发明方法的检测准确性和灵敏度大大提高，其检出率较常规方法(漂浮法)高32％-47.83％，更能准确地判断大熊猫蛔虫病感染情况，对于大熊猫蛔虫病的诊断及防控均有重要意义。

主权项

一种检测大熊猫粪样中西氏贝蛔虫虫卵的PCR法，包括设计上游引物和下游引物、提取虫卵DNA、PCR扩增和结果检查四个步骤，其特征在于：步骤a)：所述上游引物是5’ TTTTACCTTGGCATTTTGTC 3’，下游引物是5’ CTCTCAATTACTACTCAACCTCC 3’，检测基因片段长度为291bp；步骤b)：定量粪样用滤粪网过滤后取出1ml于离心管中，离心后倒掉上清液，再从粪样中取500μl于离心管中，再次离心后倒掉上清液，如此反复直到离心管中的粪渣占离心管总体积的1/5；将离心管于沸水和液氮中交替放置1min，经过数次的反复充分冻融，用常规酚氯仿法提取DNA；步骤c)：利用步骤a)所述的引物扩增步骤b)提取的DNA；步骤d)：PCR产物通过常规方法进行琼脂糖凝胶电泳检测，用紫外透射仪观察结果。