[发明专利]反转录PCR分析IVF单个植入前胚胎的基因表达的标本收集方法无效
| 申请号： | 201110362845.1 | 申请日： | 2011-11-14 |
| 公开（公告）号： | CN102586415A | 公开（公告）日： | 2012-07-18 |
| 发明（设计）人： | 虞强 | 申请（专利权）人： | 江苏迈健生物科技发展有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214000 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提出一种改良实时定量反转录PCR分析IVF单个植入前胚胎的基因表达的标本收集方法，所述分析基因表达方法包括步骤：标本收集；反转录反应；反转录阴性对照和阳性对照；RT产物进行实时定量PCR检测；使用组织细胞RNA进行优化PCR条件；在该条件下同时放大扩增阴性对照和阳性对照；采用相对定量的方法检测目的基因的表达量；以及进行统计学分析。所述的标本收集方法包括临床常规收集标本以及标本纯化的步骤。这种改良的实时定量反转录PCR技术非常敏感，高度精确，同时能产生可观的资料。利用这种方法，可以弥补Microarray的不足，对分析单个关键基因在单个细胞的表达和在IVF科研与临床上有非常广泛的应用价值。此方法为确定新的IVF和体外胚胎培养培养液的条件提供了一个重要的监测手段。 | ||
| 搜索关键词： | 转录 pcr 分析 ivf 单个 植入 胚胎 基因 表达 标本 收集 方法 | ||
【主权项】：
一种反转录PCR分析IVF单个植入前胚胎的基因表达中的标本收集方法，所述分析基因表达方法包括步骤：标本收集；反转录反应；反转录阴性对照和阳性对照；反转录产物进行实时定量PCR检测；使用组织细胞RNA进行优化PCR条件；在该条件下同时放大扩增阴性对照和阳性对照；采用相对定量的方法检测目的基因的表达量；以及进行统计学分析；其中所述标本收集的步骤包括：临床常规收集标本，经过至少三次预冷的PBS溶液洗涤；通过超细的玻璃吸管将单个受精卵或植入前胚胎或胚胎细胞，总容量为0.1μL，转移到0.9μL的RNA抽提液当中；以及经过液态氮处理后收集全部RNA；其中，所述抽提液为1×PCR缓冲液中加入0.1IU RNA酶抑制剂。
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