[发明专利]一种快速提取悬钩子属植物总RNA的方法

摘要

本发明公开了一种快速提取悬钩子属植物总RNA的方法；其特征在于取少量悬钩子属植物材料，液氮冷冻下研磨成粉，经过可选的去糖、离心步骤，或直接加入碱性细胞裂解液，进行温浴裂解；完成后通过酚-弱酸-氯仿抽提，离心去除蛋白以及绝大部分基因组DNA；上清液中加入醇进行沉淀；离心收集RNA沉淀，经过乙醇洗涤、风干后用DEPC灭菌水溶解，-80℃保存。本发明避免了使用LiCl沉淀，一步抽提去除蛋白、基因组DNA，用醇沉淀RNA，操作简单，整个过程在3小时内完成；本方法提取悬钩子属植物总RNA只需要0.1-0.2g材料，增加可选去糖步骤，适用于悬钩子属植物树莓、黑莓等多种植物材料。

主权项

一种快速提取悬钩子属植物总RNA的方法，其特征在于以下操作：(1)取2ml离心管，向离心管中加入700～1000μl去糖缓冲液，并加入5～15μl β‑巯基乙醇，于‑20℃预冷5～10min；(2)取新鲜植物材料或经液氮速冻后‑80℃保存的植物材料0.1～0.15g，加入0.1g交联聚乙烯基吡咯烷酮，在液氮冷冻条件下研磨成粉状，迅速转移至步骤(1)的离心管中，温柔上下颠倒混匀后于冰上静置10min；(3)在4℃下按照3200×g离心5～10min；(4)彻底去除步骤(3)离心所得上清液，向沉淀中加入700～1000μl 65℃预热的细胞裂解液，涡旋1min，于55～65℃保温20～30min；(5)待步骤(4)中的混合液冷却至室温后，按顺序加入细胞裂解液等体积的水饱和酚，1/80‑1/50裂解液体积的pH调节剂，1/5裂解缓冲液体积的氯仿，剧烈震荡2min；(6)在4℃下按照16000×g离心5～10min；(7)将步骤(6)离心所得上清液转入另一离心管，向管中加入上适量核酸沉淀剂，于‑20℃静置30min以上，在4℃下按照16000×g离心10min后弃上清液，保留沉淀；(8)将步骤(7)离心所得沉淀用体积分数为70～75％乙醇洗涤后室温风干，用DEPC处理水溶解后‑80℃保存；