[发明专利]一种监测DNA合成期生物发光报告基因及其应用

摘要

本发明涉及分子生物学基因合成，主要涉及一种监测DNA合成期生物发光报告基因，本发明还涉及该基因在抗肿瘤药物筛选的应用。本发明以包含人cyclinA2基因全长的PBS质粒为模板，在cyclinA2基因两端设计引物，扩增cyclinA2cDNA全长并克隆至pGL3-control载体Luc基因的5’端，形成一种可表达融合蛋白的真核重组表达载体，即“pGL3-CYCA-Luc”载体。该载体稳定转染至肿瘤细胞后可表达融合蛋白“CYCA-Luc”。体外实验证明该融合蛋白通过泛素化依赖性途径降解，可呈细胞周期依赖性变化并可用于监测S期特异性抗肿瘤药物作用效果。本发明在筛选针对S期的抗肿瘤药物等领域中发挥重要作用。

主权项

一种监测DNA合成期生物发光报告基因，其特征在于：将细胞周期蛋白A2与荧光素酶基因融合，从而形成一种可以用于监测细胞周期S期的生物发光报告基因，其核苷酸序列为：AAGCTTGCCACCATGTTGGGCAACTCTGCGCCGGGGCCTGCGACCCGCGAGGCGGGCTCGGCGCTGCTAGCATTGCAGCAGACGGCGCTCCAAGAGGACCAGGAGAATATCAACCCGGAAAAGGCAGCGCCCGTCCAACAACCGCGGACCCGGGCCGCGCTGGCGGTACTGAAGTCCGGGAACCCGCGGGGTCTAGCGCAGCAGCAGAGGCCGAAGACGAGACGGGTTGCACCCCTTAAGGATCTTCCTGTAAATGATGAGCATGTCACCGTTCCTCCTTGGAAAGCAAACAGTAAACAGCCTGCGTTCACCATTCATGTGGATGAAGCAGAAAAAGAAGCTCAGAAGAAGCCAGCTGAATCTCAAAAAATAGAGCGTGAAGATGCCCTGGCTTTTAATTCAGCCATTAGTTTACCTGGACCCAGAAAACCATTGGTCCCTCTTGATTATCCAATGGATGGTAGTTTTGAGTCACCACATACTATGGACATGTCAATTGTATTAGAAGATGAAAAGCCAGTGAGTGTTAATGAAGTACCAGACTACCATGAGGATATTCACACATACCTTAGGGAAATGGAGGTTAAATGTAAACCTAAAGTGGGTTACATGAAGAAACAGCCAGACATCACTAACAGTATGAGAGCTATCCTCGTGGACTGGTTAGTTGAAGTAGGAGAAGAATATAAACTACAGAATGAGACCCTGCATTTGGCTGTGAACTACATTGATAGGTTCCTGTCTTCCATGTCAGTGCTGAGAGGAAAACTTCAGCTTGTGGGCACTGCTGCTATGCTGTTAGCCTCAAAGTTTGAAGAAATATACCCCCCAGAAGTAGCAGAGTTTGTGTACATTACAGATGATACCTACACCAAGAAACAAGTTCTGAGAATGGAGCATCTAGTTTTGAAAGTCCTTACTTTTGACTTAGCTGCTCCAACAGTAAATCAGTTTCTTACCCAATACTTTCTGCATCAGCAGCCTGCAAACTGCAAAGTTGAAAGTTTAGCAATGTTTTTGGGAGAATTAAGTTTGATAGATGCTGACCCATACCTCAAGTATTTGCCATCAGTTATTGCTGGAGCTGCCTTTCATTTAGCACTCTACACAGTCACGGGACAAAGCTGGCCTGAATCATTAATACGAAAGACTGGATATACCCTGGAAAGTCTTAAGCCTTGTCTCATGGACCTTCACCAGACCTACCTCAAAGCACCACAGCATGCACAACAGTCAATAAGAGAAAAGTACAAAAATTCAAAGTATCATGGTGTTTCTCTCCTCAACCCACCAGAGACACTAAATCTGCAAGCTTGGCATTCCGGTACTGTTGGTAAAGCCACCATGGAAGACGCCAAAAACATAAAGAAAGGCCCGGCGCCATTCTATCCGCTGGAAGATGGAACCGCTGGAGAGCAACTGCATAAGGCTATGAAGAGATACGCCCTGGTTCCTGGAACAATTGCTTTTACAGATGCACATATCGAGGTGGACATCACTTACGCTGAGTACTTCGAAATGTCCGTTCGGTTGGCAGAAGCTATGAAACGATATGGGCTGAATACAAATCACAGAATCGTCGTATGCAGTGAAAACTCTCTTCAATTCTTTATGCCGGTGTTGGGCGCGTTATTTATCGGAGTTGCAGTTGCGCCCGCGAACGACATTTATAATGAACGTGAATTGCTCAACAGTATGGGCATTTCGCAGCCTACCGTGGTGTTCGTTTCCAAAAAGGGGTTGCAAAAAATTTTGAACGTGCAAAAAAAGCTCCCAATCATCCAAAAAATTATTATCATGGATTCTAAAACGGATTACCAGGGATTTCAGTCGATGTACACGTTCGTCACATCTCATCTACCTCCCGGTTTTAATGAATACGATTTTGTGCCAGAGTCCTTCGATAGGGACAAGACAATTGCACTGATCATGAACTCCTCTGGATCTACTGGTCTGCCTAAAGGTGTCGCTCTGCCTCATAGAACTGCCTGCGTGAGATTCTCGCATGCCAGAGATCCTATTTTTGGCAATCAAATCATTCCGGATACTGCGATTTTAAGTGTTGTTCCATTCCATCACGGTTTTGGAATGTTTACTACACTCGGATATTTGATATGTGGATTTCGAGTCGTCTTAATGTATAGATTTGAAGAAGAGCTGTTTCTGAGGAGCCTTCAGGATTACAAGATTCAAAGTGCGCTGCTGGTGCCAACCCTATTCTCCTTCTTCGCCAAAAGCACTCTGATTGACAAATACGATTTATCTAATTTACACGAAATTGCTTCTGGTGGCGCTCCCCTCTCTAAGGAAGTCGGGGAAGCGGTTGCCAAGAGGTTCCATCTGCCAGGTATCAGGCAAGGATATGGGCTCACTGAGACTACATCAGCTATTCTGATTACACCCGAGGGGGATGATAAACCGGGCGCGGTCGGTAAAGTTGTTCCATTTTTTGAAGCGAAGGTTGTGGATCTGGATACCGGGAAAACGCTGGGCGTTAATCAAAGAGGCGAACTGTGTGTGAGAGGTCCTATGATTATGTCCGGTTATGTAAACAATCCGGAAGCGACCAACGCCTTGATTGACAAGGATGGATGGCTACATTCTGGAGACATAGCTTACTGGGACGAAGACGAACACTTCTTCATCGTTGACCGCCTGAAGTCTCTGATTAAGTACAAAGGCTATCAGGTGGCTCCCGCTGAATTGGAATCCATCTTGCTCCAACACCCCAACATCTTCGACGCAGGTGTCGCAGGTCTTCCCGACGATGACGCCGGTGAACTTCCCGCCGCCGTTGTTGTTTTGGAGCACGGAAAGACGATGACGGAAAAAGAGATCGTGGATTACGTCGCCAGTCAAGTAACAACCGCGAAAAAGTTGCGCGGAGGAGTTGTGTTTGTGGACGAAGTACCGAAAGGTCTTACCGGAAAACTCGACGCAAGAAAAATCAGAGAGATCCTCATAAAGGCCAAGAAGGGCGGAAAGATCGCCGTGTAA。