[发明专利]一种肌酸酐含量检测试剂和试剂盒，及试剂盒的制作和使用方法

摘要

本发明涉及一种肌酸酐含量检测试剂和试剂盒，及试剂盒的制作和使用方法，包括肌酸酐酶、肌酸酶、肌氨酸氧化酶和辣根过氧化物酶，荧光染料5(6)-羧基-2，7-二氯二氢荧光素二特戊酸酯，包括染料底层、蛋白酶固定层、顶层保护层。本发明所使用的方法具有高度的选择性，作为蛋白质酶，其对反应物具有高度的特异性，肌酸酐酶只能催化肌酸酐的水解反应，对其他的反应底物都没有催化活性，由于检测过程中涉及到三种高度特异性的酶，本方法的选择性更是呈指数增加，试剂盒最后给出的响应是荧光响应，相与某些检测颜色变化的方法相比，荧光响应的固有特性赋予本发明更高的灵敏度以及抗干扰的能力。

主权项

一种肌酸酐含量检测试剂，其特征在于：包括肌酸酐酶、肌酸酶、肌氨酸氧化酶和辣根过氧化物酶，荧光染料5(6)‑羧基‑2，7‑二氯二氢荧光素二特戊酸酯，肌酸酐在肌酸酐酶的催化下被水解成为肌酸，肌酸在肌酸酶的催化下被水解成肌氨酸，肌氨酸随之在肌氨酸氧化酶的催化下生成甘氨酸以及少量的过氧化氢，在辣根氧化物酶的催化下，过氧化氢催化氧化了5(6)‑羧基‑2，7‑二氯二氢荧光素二特戊酸酯并生成具有荧光响应的产物，通过监测荧光增强的速率以及标准曲线，获得肌酸酐浓度，其中所述肌酸酐酶：肌酸酶：肌氨酸氧化酶：辣根过氧化物酶：荧光染料的重量比为：1∶50∶60∶5。