[发明专利]一种以农用废弃甘薯藤为原料制备微生物油脂的方法

摘要

本发明提供了一种以农用废弃甘薯藤为原料制备微生物油脂的方法，将成熟期废弃的甘薯藤粉碎或切丝后，与含有纤维素酶的柠檬酸缓冲液混合得到固液混合物，固液混合物在50℃下处理4天后，经固液分离可获得水解液，将产油微生物的种子液接种到水解液或水解液与糖的混合物中，经常规液体深层发酵获得发酵产物。从发酵产物中收集油脂菌体，经常规有机溶剂提取方法获得微生物油脂。本方法充分利用成熟期废弃的甘薯藤，是一项资源高值化技术；采用纤维素酶和果胶酶复合水解法制备甘薯藤水解液，处理方法温和，获得的水解液营养丰富，油脂转化效率高。

主权项

一种以农用废弃甘薯藤为原料制备微生物油脂的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：（1）制备甘薯藤水解液：按质量体积比1:5‑10（g/ml）将粉碎或切丝的甘薯藤与浓度为0.05mol/L、pH为4.8的柠檬酸缓冲液进行混合，固液混合物于115℃下灭菌20分钟；在每克无菌的固液混合物中加15IU的纤维素酶和100IU的果胶酶，得加酶混合物；加酶混合物在50℃下振荡处理4天，固液分离后得到的液体部分为甘薯藤水解液；（2）制备液态深层发酵培养基：甘薯藤水解液用NaOH调pH至5.5，然后在115℃下灭菌20min，得到液态深层发酵培养基；或者按照质量体积比3‑6:100（g/ml）将糖加入甘薯藤水解液中，制得含糖甘薯藤水解液，含糖甘薯藤水解液用NaOH调pH至5.5，然后在115℃下灭菌20min，得到液态深层发酵培养基；（3）制备产油菌发酵种子：低温保藏的产油菌种子用YPD液体培养基进行活化，产油菌种子活化后，接种到另一YPD液体培养基，培养至对数生长期，获得产油菌发酵种子；（4）发酵生产微生物油脂：按体积比为5%将产油菌发酵种子与液态深层发酵培养基混合，在28‑30℃下，180‑200rpm通风振荡培养8‑12天，获得发酵产物，发酵产物固液分离后收集固体，得到油脂菌体；（5）超声提取微生物油脂：按质量体积比1:4（g/ml）将油脂菌体与浓度为2 mol/L的盐酸相混合，煮沸10min后，加入等体积由氯仿和甲醇按体积比为2:1混合组成的提取液，得混合液，混合液超声萃取30分钟后，静置或离心分层，收集下层有机相；剩余的固液混合物用等体积氯仿超声萃取30分钟后，静置或离心分层，收集下层有机相，氯仿超声萃取2‑3次后，将所有的下层有机相混合，蒸馏回收有机溶剂，剩下的透明、澄清的液体组分即为微生物油脂。