[发明专利]一种以农用废弃甘薯藤为原料制备微生物油脂的方法

权利要求书

1.一种以农用废弃甘薯藤为原料制备微生物油脂的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

（1）制备甘薯藤水解液：按质量体积比1:5-10（g/ml）将粉碎或切丝的甘薯藤与浓度为0.05mol/L、pH为4.8的柠檬酸缓冲液进行混合，固液混合物于115℃下灭菌20分钟；在每克无菌的固液混合物中加15IU的纤维素酶和100IU的果胶酶，得加酶混合物；加酶混合物在50℃下振荡处理4天，固液分离后得到的液体部分为甘薯藤水解液；

（2）制备液态深层发酵培养基：甘薯藤水解液用NaOH调pH至5.5，然后在115℃下灭菌20min，得到液态深层发酵培养基；或者按照质量体积比3-6:100（g/ml）将糖加入甘薯藤水解液中，制得含糖甘薯藤水解液，含糖甘薯藤水解液用NaOH调pH至5.5，然后在115℃下灭菌20min，得到液态深层发酵培养基；

（3）制备产油菌发酵种子：低温保藏的产油菌种子用YPD液体培养基进行活化，产油菌种子活化后，接种到另一YPD液体培养基，培养至对数生长期，获得产油菌发酵种子；

（4）发酵生产微生物油脂：按体积比为5%将产油菌发酵种子与液态深层发酵培养基混合，在28-30℃下，180-200rpm通风振荡培养8-12天，获得发酵产物，发酵产物固液分离后收集固体，得到油脂菌体；

（5）超声提取微生物油脂：按质量体积比1:4（g/ml）将油脂菌体与浓度为2 mol/L的盐酸相混合，煮沸10min后，加入等体积由氯仿和甲醇按体积比为2:1混合组成的提取液，得混合液，混合液超声萃取30分钟后，静置或离心分层，收集下层有机相；剩余的固液混合物用等体积氯仿超声萃取30分钟后，静置或离心分层，收集下层有机相，氯仿超声萃取2-3次后，将所有的下层有机相混合，蒸馏回收有机溶剂，剩下的透明、澄清的液体组分即为微生物油脂。

2.根据权利要求1所述以农用废弃甘薯藤为原料制备微生物油脂的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，甘薯藤为甘薯块茎收获后被废弃的地上部分，即甘薯茎叶藤的总和，可以为粉碎的干甘薯藤或切丝的新鲜甘薯藤。

3.根据权利要求1所述以农用废弃甘薯藤为原料制备微生物油脂的方法，其特征在于，所述步骤（3）中，产油菌可以是发酵性丝孢酵母、皮状丝孢酵母或粘红酵母。