[发明专利]一种一步酶法分离培养猪精原干细胞的方法

摘要

本发明公开了一种一步酶法分离培养猪精原干细胞的方法以及培养体系。本发明方法通过采用一步酶法来分离消化猪精原干细胞，替代目前主要采用的两步酶消化方法，该方法获得细胞容易，培养时间短，细胞增殖快、状态好。通过本发明方法，解决了目前精原干细胞分离难、数量少、增殖慢、培养要求高的问题，为快速获取大量猪精原干细胞提供了一种新的方法。而且本方法操作简便，实验成本低，降低了实验失败的风险，易于推广应用。

主权项

一种一步酶法分离培养猪精原干细胞的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）将仔猪的睾丸放入盛有PBS的容器中，用PBS洗涤2~3次，去除血污；（2）去掉睾丸白膜和结缔组织，将剩下的睾丸组织剪成小块，转移到培养皿中；（3）加入10倍体积的PBS，用吸管吹打，静置，待睾丸组织沉到底部后，弃上清；（4）重复步骤（3）2~3次；（5）加入10倍体积的胶原酶消化，于37 ℃的水浴锅100 rpm，然后用吸管吹打，直到看不到组织块；（6）加入5~10 ml的PBS，吹打，在16 ℃、600 rpm离心5 min，弃上清，收集底部细胞；（7）用差异贴壁培养基重悬细胞，调整细胞浓度为5×106个/ml，接种到事先用0.1 %明胶包被的培养瓶中，在无菌培养箱中培养。