[发明专利]一种一步酶法分离培养猪精原干细胞的方法有效
| 申请号： | 201110272927.7 | 申请日： | 2011-09-15 |
| 公开（公告）号： | CN102417893A | 公开（公告）日： | 2012-04-18 |
| 发明（设计）人： | 张守全;白银山 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/076 | 分类号： | C12N5/076 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 林丽明 |
| 地址： | 510642 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 一步 分离 培养 猪精原 干细胞 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种一步酶法分离培养猪精原干细胞的方法，其特征在于包括如下步骤：
（1）将仔猪的睾丸放入盛有PBS的容器中，用PBS洗涤2~3次，去除血污；
（2）去掉睾丸白膜和结缔组织，将剩下的睾丸组织剪成小块，转移到培养皿中；
（3）加入10倍体积的PBS，用吸管吹打，静置，待睾丸组织沉到底部后，弃上清；
（4）重复步骤（3）2~3次；
（5）加入10倍体积的胶原酶消化，于37 ℃的水浴锅100 rpm，然后用吸管吹打，直到看不到组织块；
（6）加入5~10 ml的PBS，吹打，在16 ℃、600 rpm离心5 min，弃上清，收集底部细胞；
（7）用差异贴壁培养基重悬细胞，调整细胞浓度为5×106个/ml，接种到事先用0.1 %明胶包被的培养瓶中，在无菌培养箱中培养。
2.根据权利要求1所述的一步酶法分离培养猪精原干细胞的方法，其特征在于所述细胞培养箱的培养条件为37 ℃，5 % CO2，饱和湿度。
3.根据权利要求1所述的一步酶法分离培养猪精原干细胞的方法，其特征在于所述用于培养细胞的培养液主要成分为：DMEM 83 %，L-谷氨酰胺1 %，非必需氨基酸1 %，β-巯基乙醇55 μM，胎牛血清15 %。
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