[发明专利]一种重组细菌鞭毛蛋白衍生多肽的制备和活性鉴定方法

摘要

本发明公开了一种重组鞭毛蛋白衍生物(辐抗肽)的制备方法及其生物活性的鉴定方法，属于生物产品的生产方法领域。在获得细菌鞭毛蛋白衍生物cDNA之后，将此cDNA插入温度敏感型原核表达载体，构建原核高效表达工程菌，在此基础上建立了一套工程菌的诱导表达、包涵体的分离与裂解、辐抗肽的体外复性和分离纯化工艺。利用此工艺能最终得到具有生物学活性的辐抗肽纯品，实现辐抗肽的工业化生产；本发明还提供了用于辐抗肽生物学活性的细胞系的建立方法以及辐抗肽活性的鉴定方法。

主权项

一种制备重组的细菌鞭毛蛋白衍生多肽(bacterial flagellin dervied peptide)‑辐抗肽(FuKangTai)的方法，其特征为利用温度诱导型表达载体在原核细胞中实现重组辐抗肽的高效表达，采用柱上复性的方法在变性剂介导下实现辐抗肽的体外复性，并应用离子交换层析方法获得了纯化的辐抗肽蛋白产物，该方法包括：(1)应用PCR的方法体外合成了辐抗肽的cDNA；(2)将辐抗肽的cDNA克隆代温度诱导型原核表达载体中，构建辐抗肽表达载体；(3)用辐抗肽表达载体转化感受态大肠杆菌，构建辐抗肽基因表达工程菌；(4)30℃条件下培养基因表达工程菌，42℃条件下诱导辐抗肽表达；(5)分离辐抗肽包涵体，用变性剂裂解辐抗肽包涵体；(6)用DEAE阴离子交换层析实现辐抗肽的体外复性；(7)用DEAE阴离子交换层析实现对辐抗肽的进一步纯化。