[发明专利]一种重组细菌鞭毛蛋白衍生多肽的制备和活性鉴定方法

说明书

技术领域

本发明是关于一种生物工程产品的生产方法和活性鉴定方法，具体涉及利用PCR方法构建重组细菌鞭毛蛋白衍生多肽及其表达、分离和纯化的制备方法及其生物学活性的鉴定方法。 

背景技术

研究表明电离辐射主要通过诱导细胞凋亡造成多器官损伤，例如骨髓造血干细胞和肠道上皮细胞等敏感细胞，在电离辐射后发生明显的细胞凋亡现象。如果能在机体受到电离辐射之前或之后短时间内，增强机体细胞尤其是造血干祖细胞和胃肠道上皮细胞的抗凋亡能力，必然会增强机体对辐射的抵抗性(GudkovAV，et al.Radioprotection：smart games with death.J Clin Invest，2010，120：2270-2273)。 

有研究发现TLR5(Toll Like Receptor 5)受体的特异性配体-沙门氏菌鞭毛蛋白及功能同源衍生物CBLB502(含有鞭毛蛋白主要功能结构域的重组蛋白，我们称之为辐抗肽)可以和细胞表面的TLR5结合并激活NF-κB信号通路，在不引发急性炎症反应的情况下，减轻射线引起的肠道上皮细胞、血管内皮细胞和造血细胞凋亡，保护细胞免受辐射损伤并促进组织再生，而并没有降低肿瘤的辐射敏感性(Burdelya LG，et al.An agonist of toll-like receptor 5has radioprotective activity in mouse and primate models.Science，2008，320：226-230)。 

Toll样受体家族是一类参与病原微生物引起的先天免疫的蛋白家族。TLRs属于模式识别受体，通过病原相关分子模式(Pathogen-Associated Molecular Pattern，PAMP)，特异地识别病原微生物进化中保守的抗原分子，如脂多糖(LPS)、肽聚糖、酵母多糖以及病原微生物的核酸等，从而有效监测病原微生物的入侵以及诱导机体免疫应答反应(Kumar H，et al.Toll-like receptors and innate immunity.BBRC，2009，388：621-625)。此外，TLRs信号激活能够抑制骨髓间充质细胞分化及促进MSC细胞增殖，多个TLR家族成员可以活化影响多种肿瘤细胞生长(Pevsner-Fischer M，et al.Toll-like receptors and their ligands control mesenchymal stem cell functions.Blood，2007，109：1422-1432；Rooban T，Elizabeth J，Umadevi KR，et al.Sociodemographic correlates of male chewable smokeless tobacco users in India：a preliminary report of analysis of National Family Health Survey，2005-2006.Indian J Cancer，2010，47Suppl 1：91-100)。上述这些研究表明，TLR信号通路不仅在病原微生物引起的先天免疫 方面发挥作用，在细胞增殖分化、肿瘤生长等多个方面也发挥重要作用。