[发明专利]细胞高富集靶向分离方法

摘要

一种细胞高富集靶向分离方法，1、将骨髓、脐带血、外周血或经血与标本稀释液按照1∶1混匀；2、将红细胞沉降液全部加入步骤1混合后的液体中，放入容器封闭后充分混匀，室温静置；3、用移液管将上清液移至离心管经过离心机离心或用移液管将上清液直接移至无菌容器中，将上清液加入到装有高富集细胞分离液的离心管中；4、将步骤3中的收集液离心，离心后吸取中间云雾状的薄层加至新的离心管中；5、在步骤4的收集液中加注射用生理盐水混匀、离心，弃去上清，收集；再用注射用生理盐水洗涤、再离心，收集细胞备用。本发明便于操作、细胞的回收率≥95％、细胞的存活率≥85％、提高了细胞提取精度和效率，节约了分离提取细胞的成本。

主权项

一种细胞高富集靶向分离方法，其特征在于：包括如下步骤：(一)专用试剂的组成和制备：将氯化钠NaCl、氯化钾KCl、氯化钙CaCl2·2H2O和蒸馏水混合配制成标本稀释液A液；将羟乙基淀粉和蒸馏水混合配制成红细胞沉降液B液；将葡聚糖和蒸馏水混合配制成高富集细胞分离液C液；将辅酶、三磷酸腺苷和蒸馏水混合配制成高富集细胞保存液D液；(二)分离操作方法步骤：(1)将含有枸椽酸钠或肝素抗凝的骨髓、脐带血、外周血或经血与A液按照1∶1的比例充分混匀；(2)将B液全部加入步骤(1)混合后的液体中，放入容器封闭后充分混匀，室温静置20‑30min；(3)室温静止后观察有明显的红细胞沉降至最下层时，用移液管将上清液移至离心管中，并置于离心机中，离心力1210Xg(2500rpm)，离心4‑5min；或用移液管将上清液移至无菌容器中；(4)取步骤(3)离心后的离心管，弃上清液，每管加注射用生理盐水混匀，收集离心管中底部的细胞合并到移植离心管中；(5)取新的离心管，每支加入C液，并将步骤(4)所得细胞悬液或步骤(3)移至无菌容器中的上清液沿离心管壁缓缓加入到装有C液的离心管中，同时保证两液体分界清楚；(6)将步骤(5)的离心管用离心力720Xg(1200～2000rpm)，离心20‑30min；(7)将步骤(6)离心后吸取中间云雾状的薄层加至新的离心管中，每支离心管中收集液的体积≤20ml；(8)在步骤(7)收集液中加注射用生理盐水充分混匀，离心力1210Xg(2500rpm)，离心4‑5min，弃去上清，收集；再用注射用生理盐水洗涤2次，离心条件同上，收集细胞备用。