[发明专利]铁皮石斛的杂交育种方法

摘要

铁皮石斛的杂交育种方法，本方法包括铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)母株人工授粉、无菌播种、壮苗培养和试管苗移栽各步骤。当铁皮石斛杂交种人工授粉后，将得到的杂交果实消毒杀菌后切开，用种子萌发培养基培养，使种子萌发成原球茎并进一步形成小苗，再将无菌播种获得的小苗接种到专门配制的壮苗培养基上进行壮苗培养，最后进行试管苗移栽。本发明采用独特的培养基，铁皮石斛杂交种子的萌发率高、成苗快、种苗品质好，具有操作性强，应用价值高等优点，为铁皮石斛杂交育种及其种苗繁殖开辟了一条新的途径。

主权项

一种铁皮石斛的杂交育种方法，其特征在于包括以下工艺步骤：(1)人工授粉：选定用于杂交的两种铁皮石斛亲本，采集父本的花粉授于母本的柱头上，两个亲本互为父、母本进行正反交；(2)无菌播种：当铁皮石斛杂交种授粉后，在果实发育基本成熟而果实未开裂时，将该果实作为外植体用70％‑80％酒精消毒20‑60秒后，用无菌水冲洗2‑5次后置于0.1％‑0.2％的升汞中消毒15‑30分钟，再用无菌水漂洗4‑6次后切开果实，用接种针将黄白色粉末状胚接种到种子萌发培养基上培养，种子萌发成原球茎，并进一步形成完整的小植株，所述的种子萌发培养基每升含蛋白胨0.5‑4g，椰子汁50‑150ml，蔗糖15‑30g，琼脂3.5‑5g，肌醇40‑100mg，盐酸硫胺4.5‑12mg，甘氨酸1.5‑4.0mg，烟酸1.0‑2.5mg，D‑泛酸钙0.9‑2.5mg，抗坏血酸0.8‑2.0mg，吡哆辛盐酸0.4‑1.5mg，生物素0.09‑0.25mg，其余为MS培养基中的大量元素和微量元素成分；(3)壮苗培养：将无菌播种获得的密集的小植株接种到壮苗培养基上培养，小植株进一步形成4～6cm高的带根小苗，所述的壮苗培养基每升含蛋白胨0.5‑3g，水解酪蛋白0.1‑0.5g，蔗糖15‑30g，琼脂3.5‑5g，α‑萘乙酸0.5‑3.0mg，肌醇40‑100mg，盐酸硫胺4.5‑12mg，甘氨酸1.5‑4.0mg，烟酸1.0‑2.5mg，D‑泛酸钙0.9‑2.5mg，抗坏血酸0.8‑2.0mg，吡哆辛盐酸0.4‑1.5mg，生物素0.09‑0.25mg，香蕉匀浆50‑150g，胡萝卜汁10‑50g，苹果汁10‑50g，马铃薯汁10‑50g，其余为MS培养基中的大量元素和微量元素成分；(4)试管苗移栽：当小苗形成的植株长至4‑6厘米时，将培养瓶转移到自然光下炼苗7‑14天，然后将其从组培瓶中取出，洗净根部的培养基，移至水苔或泥炭和兰石按体积比1∶1的混合基质中栽培，得到株高7～9cm，每丛有3～5个芽的种苗；在上述(2)‑(3)各步骤中所用的培养基均为PH5.4～5.8，培养温度28‑30℃，每天光照10‑12小时，光照度1500～2000lx。