[发明专利]一种特异性指示禽粪便污染的基因检测方法

摘要

本发明公开了一种特异性指示禽粪便污染的基因检测方法，包括从水域中提取待测水样DNA；用特异性引物荧光定量PCR选择性扩增样品DNA；将扩增产物核苷酸序列与基因标记Av-Bac核苷酸序列进行比对的步骤。本发明将基因标记Av-Bac用于水体中禽源粪便污染（非点源污染）的溯源，具有显著的宿主特异性，正确判别率可达100%。并可定量检测禽粪便污染情况，从而能正确评估其污染贡献率。

主权项

一种特异性指示禽粪便污染的基因检测方法，其特征在于，包括以下步骤：a)从水域中提取待测水样DNA；b)用荧光定量PCR扩增样品DNA；其中，引物核苷酸序列为：正向引物Av‑BacF: 5’‑ CTTCGATGGATAGGGGTTCT‑3’反向引物Av‑BacR: 5’‑CGCCCATTGACCAATA‑3’探针序列为：FAM‑GAACTGAGACACGGTCC‑TAMRA；c)将上述扩增产物核苷酸序列与下述核苷酸序列进行比对：Av‑Bac：5’‑CTTCG ATGGA TAGGG GTTCT GAGAG GAAGG TCCCC CACAT TGGAA CTGAG ACACG GTCCA AACTC CTACG GGAGG CAGCA GTGAG GAATA TTGGT CAATG GGCG‑3’若二者核苷酸序列相同，且该序列平均浓度为每毫升样品中含2.5±0.3 log10拷贝，则该水域判断为受禽粪便污染的水域。